慢性HBV感染者Th17/Treg的变化及其与肝功能和HBV复制水平的关系研究

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目的:本研究以慢性HBV感染者为实验组,以健康体检者(HC)为对照组,研究无症状HBV携带者(AsC)、慢性乙型肝炎患者(CHB)、乙肝肝硬化患者(LC)、HBV相关肝细胞癌患者(HCC)外周血Th17、Treg的变化及其与肝功能和HBV复制水平的关系,为阐述HBV感染慢性化及疾病发展的机制提供理论依据。方法:本研究选取2013年11月至2015年3月来我院就诊和住院的慢性无症状HBV携带者、慢性乙型肝炎患者、乙肝肝硬化患者、乙肝相关肝细胞癌患者共137例,其中慢性无症状HBV携带者24例、慢性乙型肝炎患者64例、乙肝肝硬化患者27例和乙肝相关肝细胞癌患者22例,同时选取来我院体检的正常健康者26例作为健康对照组。采用ELISA法检测HBV-markers (包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb);采用实时荧光定量PCR (real-time PCR)法检测HBV-DNA水平;采用全自动生化分析仪检测ALT、AST、TBil等肝功能指标;采用流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测外周血Th17、Treg细胞占CD4+T细胞比率;应用SPSS 17.0统计学软件对所有数据进行统计分析。结果:1.对于Th17细胞占CD4+T细胞比率(%)的比较:五组间Th17细胞占CD4+T细胞比率(%)方差分析发现差异具有统计学意义(F=22.332,p<0.05),进一步两两比较发现:LC组(5.87±2.69)较HC组(1.74±0.64)、AsC组(1.47±0.77)、CHB组(4.58±2.75)、HCC组(2.23±1.12)升高,差异有统计学意义(p<0.05);CHB组(4.58±2.75)较HC组(1.74±0.64)、AsC组(1.47±0.77)、HCC组(2.23±1.12)升高,差异有统计学意义(p<0.05);HC组(1.74±0.64)、AsC组(1.47±0.77)、HCC组(2.23±1.12)间差异无统计学意义(p>0.05);2.对于Treg细胞占CD4+T细胞比率(%)的比较:五组间Treg细胞占CD4+T细胞比率(%)方差分析发现差异具有统计学意义(F=12.527,P<0.05),进一步两两比较发现:HCC组(3.70±2.07)较HC组(1.21±0.56)、AsC组(1.43±0.73)、CHB组(2.45±1.39)、LC组(2.44±1.15)升高,差异有统计学意义(p<0.05);CHB组(2.45±1.39)和LC组(2.44±1.15)较HC组(1.21±0.56)和AsC组(1.43±0.73)升高,差异有统计学意义(p<0.05);CHB组(2.45±1.39)和LC组(2.44±1.15),HC组(1.21±0.56)和AsC组(1.43±0.73)组间差异均无统计学意义(p>0.05);3.对Th17细胞与Treg细胞的比值(Th17/Treg)的比较:五组间Th17/Treg方差分析发现差异具有统计学意义(F=19.571,p<0.05),进一步两两比较发现:LC组(2.68±1.09)较HC组(1.49±0.27)、AsC组(1.16±0.62)、CHB组(2.06±1.11)、HCC组(0.72±0.39)升高,差异有统计学意义(p<0.05);HCC组(0.72±0.39)较HC组(1.49±0.27)、AsC组(1.16±0.62)、CHB组(2.06±1.11)、LC组(2.68±1.09)降低,差异有统计学意义(p<0.05);CHB组(2.06±1.11)较HC组(1.49±0.27)和AsC组(1.16±0.62)升高,差异有统计学意义(P<0.05);HC组(1.49±0.27)和AsC组(1.16±0.62)间差异无统计学意义(P>0.05)。4.Th17细胞和Treg细胞相关性分析:HC组Th17细胞和Treg细胞(r=0.624xx,p<0.05),CHB组Th17细胞和Treg细胞(r=0.738xx,p<0.05),LC组Th17细胞和Treg细胞(r=0.644xx,p<0.05),均存在较好的正相关关系。AsC组Th17细胞和Treg细胞,HCC组Th17细胞和Treg细胞无相关性。5.Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg与肝功能相关性分析:CHB组Th17细胞与ALT存在正相关性(r=0.298xx,p<0.05),与AST和TB间无相关性;Treg细胞与ALT、AST, TB间无相关性;Th17/Treg与TB间存在正相关(r=0.270xx,p<0.05),与ALT和AST间无相关性。LC组Th17与ALT存在正相关性(r=0.644xx,p<0.05),与AST和TB间无相关性;Treg细胞与ALT存在正相关性(r=0.506xx,p<0.05),与AST和TB间无相关性;Th17/Treg与ALT、AST、TB间无相关性。HC组、AsC组、HCC组Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg与肝功能(ALT、AST、TB)无相关性。6.慢性HBV感染者Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg与HBV-DNA间无相关性。结论:慢性HBV感染者体内的Th17细胞、Treg细胞处于相对活跃的状态,在一定程度上与患者的肝功能呈正相关。LC组Th17/Treg明显高于HC组、AsC组、CHB组、HCC组,CHB组Th17/Treg较HCC组、AsC组、HC组高。说明在CHB和LC体内,以Thl7细胞作用为主,且由CHB发展到LC的过程中,是一个炎症不断发展的过程。Th17细胞、Treg细胞与慢性HBV感染者HBV-DNA载量间无相关性,说明Th17细胞、Treg细胞并不能直接影响HBV的复制。HCC患者Treg细胞、Th7/Treg明显高于HC组、ASC组、CHB组、LC组,说明Treg细胞与HBV相关肝细胞癌的发生、发展密切相关。
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