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溃疡性结肠炎(Ulcerative colitic, UC)是一种病因和发病机制不明的炎症性肠病(inflammatoey bowel disease, IBD)。目前认为其发病可能与遗传、免疫、感染及精神等因素的相互作用有关,而有关免疫学的发病机制是目前研究较多的方面。肠道是人体与外界抗原接触的主要场所,因此肠道的局部反应需要精密地调节以避免对食物性抗原和正常菌群产生免疫反应,同时又能有效地防御病原体。在人体以及动物模型中的研究显示,调节性T细胞(regulatory T cell, Treg, Tr)在保持肠道稳态中起重要作用。Treg数量的减少,表面分子表达的缺陷,抑制功能的受损,都与IBD的发生相关。近年来Treg细胞在IBD发病中的研究越来越受到重视。由于UC发病的原因和发病机制复杂,给治疗带来一定的困难。目前溃疡性结肠炎的治疗主要有激素、磺胺类药和免疫抑制剂等,但效果欠佳,而且,副作用明显。近几年,人们也在寻求中医治疗UC的方法,中药也越来越受到重视。UC在中医学属于“久泻、久痢”范畴,治疗上急性活动期一般以驱邪为主,健脾助运、清化湿热。大黄牡丹汤为中医传统方剂,具有清热解毒的功效,本实验室前期试验研究表明大黄牡丹汤能改善UC模型小鼠的炎症症状,具有一定的治疗作用,能提高机体固有免疫能力,对细胞免疫功能亢进有明显的抑制作用,能抑制细胞因子TNF-a、IL-1β的生成。在此基础上本论文实验中探讨大黄牡丹汤对UC模型小鼠Treg细胞的影响。目的通过小鼠UC模型的建立,观察大黄牡丹汤对小鼠UC的治疗作用,分析外周及肠道Treg细胞数量和功能,外周血细胞因子等,探讨Treg在UC发病中的变化规律及大黄牡丹汤对Treg细胞的影响,进一步阐释大黄牡丹汤在UC治疗中的免疫药理机制。方法:一、小鼠UC模型:选用雌性BALB/c小鼠,用200μl,15mg/ml三硝基苯磺酸(TNBS)的乙醇溶液通过直肠一次性给药制作实验性溃疡性结肠炎小鼠模型。给药后检测小鼠体重、疾病活动指数、肠炎症指数的变化以及肠道组织病理切片的炎症改变,以作为模型成功的评判标准二、药物治疗:造模后小鼠给予大黄牡丹汤治疗,观察大黄牡丹汤对UC小鼠体重、疾病活动指数(DAI)肠道炎症指数的影响;造模后第八天通过流式细胞术检测外周血和PPs中Treg细胞的数量变化;用ELISA法检测大黄牡丹汤对UC小鼠血清细胞因子IL-10、TGF-β影响;通过免疫组化检测PPs和结肠粘膜中原位Foxp3的表达,观察大黄牡丹汤对外周血和结肠粘膜中Treg细胞的影响。结果:造模小组与正常组相比,造模组小鼠在灌肠后第二天就出现松毛,精神萎靡,肛周有黄色稀便沾染,第三天开始稀便症状逐渐缓解。观察过程中小鼠出现体重下降,疾病指数最高为5.15±0.80,肉眼病理组织学评分为6.25±0.95。造模后一周处死小鼠,解剖取出结肠观察发现模型组小鼠结肠与周围组织粘连伴肠腔扩张,肠壁增厚,组织多数粘膜水肿、充血、有溃疡形成。病理切片HE染色后在光镜下观察,发现部分部位出现充血坏死,肉芽组织形成,隐窝丢失,炎症细胞浸润,炎症组织评分为8.15±0.96。与模型组相比,给予大黄牡丹汤组的UC小鼠疾病活动指数和炎症指数明显的降低(2.45±0.80,4.52±1.52)光镜下病理组织评分也明显的降低(6.91±1.14)模型组外周血和PPs中Treg细胞比例较正常组明显的升高,给药组Treg细胞数量低于模型组,中药组Treg数量低于阳性药组,但两者都高于正常组。模型组血清中IL-10、TGF-β含量明显的高于正常组,给药组两者的含量明显地高于模型组,也明显高于正常组。结论:应用三硝基苯磺酸-乙醇成功建立了实验性溃疡性结肠炎的小鼠模型,该模型造模时间短,方法简单实用,属于急性发病,可作为UC的动物模型进行药理、药效研究。大黄牡丹汤能改善UC模型小鼠的炎症症状,对小鼠UC有一定的治疗作用,能明显的降低外周血、PPs和肠道固有层中的Treg细胞的数量,并提高血清中的IL-10和TGF-β细胞因子的含量,大黄牡丹汤影响Treg细胞数量及功能是其发挥治疗实验性结肠炎小鼠炎症作用的机制之一。