人颗粒溶素的克隆表达、抗体制备及其临床应用

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为了获得具有生物活性的GNLY蛋白质,并探讨其与某些临床疾病的相关性,该研究构建了重组原核表达质粒pET28a(+)-GNLY,在大肠杆菌中诱导表达出GNLY蛋白,并获得纯化的GNLY;经Westenblot证实GNLY具有免疫原性;MTT鉴定GNLY具有杀伤肿瘤细胞的生物学活性。用GNLY免疫兔制备了高效价的抗人GNLY多克隆抗体;以初步建立的ELISA方法定量检测人血清中GNLY含量;结果表明原发性肝癌患者组的GNLY血清水平低于正常对照组(P<0.05),乙肝病毒感染急性期患者组的GNLY血清水平显著高于正常对照组(P<0.01)。以建立的实时荧光定量PCR方法对人PBMC中GNLY的mRNA表达水平进行定量检测,结果表明原发性肝癌患者组PBMC中GNLY的mRNA水平低于正常对照组(P<0.05),乙肝病毒感染急性期患者组PBMC中GNLY的mRNA水平显著高于正常对照组(P<0.01)。
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