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目的:恙虫病是一种由恙虫病东方体（Orientia tsutsugamushi）感染引起的急性发热性疾病,主要通过携带病原体的恙螨幼虫叮咬传播。其临床特征主要为发热、头痛,临床表现从无症状到多器官衰竭差异很大。恙虫病传统流行范围主要为环太平洋亚太地区（恙虫病三角区）,近年来在非洲、南美洲也发现恙虫病感染病例,提示其流行范围不断扩大。本研究通过多位点序列分型（Multilocus Sequence Typing,MLST）方法对海南岛临床患者恙虫病东方体群体多态性进行了研究,利用实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法对患者恙虫病东方体DNA载量进行定量分析,并与临床检查数据进行相关性分析。本研究为海南岛临床感染恙虫病东方体的分布和群体结构、恙虫病东方体致病性相关因子的研究提供重要的基础数据,为海南岛恙虫病的防治提供科学依据。方法:（1）基于MLST的海南岛临床患者恙虫病东方体群体多态性研究,采用基于gps A,mdh,nrd B,nuo F,ppd K,suc D,suc B这7个管家基因的MLST方法对2018年7月～2021年5月海南岛临床感染恙虫病患者样本进行群体遗传结构分析,并将其结果与Pub MLST比较,得出序列型并构建系统发育进化树,对海南岛临床患者恙虫病东方体群体多态性进行研究。对其中一名携带混合型MLST相关管家基因的患者的血液样本和焦痂样本进行分析,比较其血液样本和焦痂样本中恙虫病东方体群体结构的组成。（2）恙虫病东方体DNA载量与病情的相关性分析,通过以tsa 56 k Da基因为靶点的巢式PCR,筛查出2018年～2021年海南岛临床恙虫病阳性患者,然后对其阳性样本进行real-time PCR定量检测,得到恙虫病阳性患者血液样本DNA载量,结合其基因型、患者信息和临床指标对恙虫病东方体DNA载量与病情的相关性进行分析。结果:（1）利用基于7个管家基因的MLST方法成功对97例恙虫病阳性患者进行了分析,其中74例患者测序结果为单一基因型,23例患者为MLST混合基因型感染。本研究发现51个新的序列型（Sequence Typing,ST）和72个新的等位基因。通过goe BURST可视化分析海南岛STs,以七个基因座中有一个基因座或两个基因座不同为标准定义克隆复合体（clonal complex,CC）,发现4对单基因座变异（Single locus variant,SLV）的CCs和43个未与其他任何ST相连接的菌株;与Pub MLST数据库中STs相比,海南岛STs与海南岛外已知的STs之间没有单基因座变异和双基因座变异（double locus variant,DLV）连接,未发现共同CC;以七个基因座中有两个以上基因座相同为标准来筛选STs之间的假设性相连时,所得结果为海南岛ST99、ST100、ST104、ST101、ST102、ST129、ST128与老挝和泰国的ST25有假设性相连,老挝的ST70、ST71、ST72、ST74和泰国的ST21,与海南岛发现的ST110有假设性相连,澳大利亚标准株Sido（ST45）与海南岛发现的ST106有假设性相连,这些相连的STs可能有共同的克隆起始（clonal founders）。结合进化树分析,结果表明海南岛最多的ST和相连的STs在同一分支且其tsa 56 k Da分型也相同,并且ST143型的样本均来自琼中黎族苗族自治县;MLST分型处于同一分支的STs在tsa 56 k Da分型中可能属于不同的基因型。其中23例患者的测序结果在多个位点出现双峰,将其定义为混合基因型感染,对其中一名患者血液样本和焦痂样本的gps A和mdh管家基因进行克隆验证,确认该患者存在混合感染,其血液样本和焦痂样本混合基因型比例一致,但其56k Da TSA分型检测未发现混合感染。（2）利用real-time PCR方法成功对135例恙虫病阳性患者血液DNA载量进行了定量,占巢式PCR阳性恙虫病患者的95.07%,表明我们新建立的real-time PCR方法具有较高的灵敏度。117名未用多西环素恙虫病患者O.tsutsugamushi DNA载量的中位数为3.11×10~3copies/m L,范围为44copies/m L～3.2×10~6copies/m L。海南岛恙虫病东方体基因型有Karp（54.70%）、Gilliam（37.61%）、TA763（6.84%）、Kato＿B（0.85%）。Karp组患者的DNA载量明显高于Gilliam组（P=0.01）和TA763组（P=0.001）;黎族患者的DNA载量明显高于汉族（P=0.018）;第二个季度恙虫病患者DNA载量明显高于第三季度（P=0.005）和第四季度（P=0.008）;总胆红素TBil与DNA载量呈正相关（相关系数为0.454,P=0.015）;患者体温与DNA载量呈正相关（相关系数为0.272,P=0.022）;其他指标无显著差异或者不具有相关性。结论:（1）基于MLST结果分析表明,海南岛恙虫病东方体具有较高群体多态性,其进化是相对独立的;基于MLST的分型与基于tsa 56 k Da基因分型之间具有一定的差异。对携带混合型MLST患者的分析表明,该患者血液和焦痂中MLST混合基因型比例一致且只有一个焦痂,其可能是由一只感染多个恙虫病基因型的恙螨叮咬引起的,但是因为其携带的主要抗原蛋白56k Da TSA一致,使面临较小的宿主选择压力,因此在恙虫病东方体由焦痂感染部位向血液扩散的过程中MLST的混合基因型得以保留。（2）基于real-time PCR结果分析,建立的基于恙虫病tsa 56 k Da基因的real-time PCR的灵敏度较高（95.07%）。海南岛恙虫病优势基因型主要为Karp株（54.70%）,Karp株感染患者组的DNA载量明显高于Gilliam组和TA763组,推测在Karp基因型感染中,恙虫病东方体可以更有效的繁殖,免疫清除速度更慢。黎族患者的DNA载量明显高于汉族,有可能是民族遗传差异所导致。总胆红素TBil与DNA载量呈正相关,提示恙虫病东方体感染能够对肝脏引起损伤,且其损伤程度和DNA载量具有相关性。