小麦K199成熟胚组织培养体系的建立和基因转化初探

来源 :中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangshun1025
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基因工程已经成为作物种质改良的有效办法,但是由于小麦(Triticum aestivum L.)染色体组来源复杂,以及作为单子叶植物的特点,其相应的遗传转化研究,特别是农杆菌介导的转化研究进展缓慢。   本实验以小麦科农199(K199)的完整种子、离体成熟胚和幼叶作为外植体,探讨了取材方式和培养条件对小麦离体培养的影响。结果表明,破碎的离体成熟胚和叶片基段与其他材料相比是更为良好的小麦组织培养起始材料;破碎胚途径培养愈伤时,种子萌发4h为最佳取材时间,添加2 mg/L2,4-D的MB培养基更有利于获得胚性愈伤;叶基段培养愈伤时,采用光培养比暗培养更有利于提高有效出愈率。   通过比较小麦破碎成熟胚和叶片诱导产生的愈伤在不同分化培养基上的表现,认为这两种愈伤在含有1mg/L KT和0.5mg/L2,4-D的MB培养基上可以实现再生率的最大化,经过梯度实验,可以明显的看出适当浓度的2,4-D的加入会有利于促进愈伤的正常分化,从而获得完整、健康的再生植株;同时,与单激素相比,在含有KT的培养基中加入适量的6-BA也同样起到促进正常分化的作用,但与2,4-D相比仍有差距。   通过SAM途径的农杆菌介导的小麦转化与常用的愈伤转化法相比更方便、更快捷,本实验以K199为受体材料,证明了此种方法在此品种上的可行性;同时通过梯度实验,基本确定了最适浸染时间为16h和最适菌液浓度0D600为0.5,并最终获得了转基因植株。
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