论文部分内容阅读
三-(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯(TBC)作为一种新型的含溴阻燃剂近些年来已经被人类广泛的使用。TBC在环境中可保持较强的稳定性及生物聚集性,因而对环境具有潜在的危害性,但目前关于TBC对生态系统的危害性的研究还较少。斑马鱼作为一种新型的模式生物在环境毒理领域已得到越来越广泛的应用与研究。本文以成年雄性斑马鱼和斑马鱼胚胎作为研究对象,探讨了TBC、E2(17β雌二醇)单一暴露以及TBC与E2联合暴露对斑马鱼雄性生殖系统和胚胎的毒性作用及潜在的致毒机制。将成年雄性斑马鱼暴露于0.1%DMSO(对照组)、5mg/L TBC、25mg/L TBC、2.5mg/L E2及5mg/L TBC+2.5mg/L E2中7天,记录斑马鱼的死亡率;而后将雄鱼解剖取精巢,利用透射电镜观察其超微结构变化。结果发现TBC对成年雄性斑马鱼无明显的致死作用,但会破坏精子超微结构,导致精子发育畸形。将成年雌性斑马鱼暴露于0.1%DMSO、5mg/L TBC、25mg/L TBC、2.5mg/L E2及5mg/L TBC+2.5mg/L E2中7天,记录斑马鱼的死亡率;并将各组雌性成鱼与正常雄鱼进行交配,记录各组雌鱼的产卵量及产卵率并统计各组雌鱼所产胚胎的孵化率、致畸率以及致死率等。结果发现单一TBC暴露7天对成年雌性斑马鱼无明显致死作用,但会影响引起雌鱼产卵率及产卵量的下降,并且会降低子代胚胎72hpf的孵化率,引起120hpf幼鱼的畸形,且随着TBC浓度的升高,毒性作用亦增强。E2单一暴露7天会显著引起成年雌鱼的死亡,并且会显著降低雌鱼的产卵率及产卵量。为了分析TBC对斑马鱼胚胎的毒性效应,将2hpf的斑马鱼胚胎暴露于0.2、1、5和25μg/mL的TBC中,并且在24、72、120hpf三个时间节点对胚胎进行形态学的观察和统计。实验结果显示,TBC对斑马鱼胚胎72hpf孵化率的抑制作用和120hpf致畸作用呈现出剂量效应(P<0.01),但是在120hpf后,经TBC暴露的胚胎未出现明显的死亡(P<0.05);计算得出TBC的EC50为1.248μg/mL。为了进一步观测TBC及E2对胚胎的联合致毒效应。将2hpf的斑马鱼胚胎暴露于0.1、0.5、2.5和12.5μg/mL的E2以及0.2、1、5、25μg/mL的TBC+2.5μg/mL E2中。在24、48、72、120hpf四个时间节点对胚胎进行形态学的观察和统计,收集胚胎进行RT-PCR,观测幼鱼体内VTG和ER-α基因表达量的变化。实验结果显示,单一E2暴露会显著地引起斑马鱼胚胎的死亡(P<0.01),且显著降低了斑马鱼胚胎的孵化率(P<0.01);而在120hpf, TBC会导致幼鱼的体位异常(侧体位)、脊椎弯曲和尾部弯曲等畸形形态的出现,E2不仅会引起幼鱼体位异常(侧体位)、脊椎弯曲和尾部弯曲,还会引起心包囊肿、尾部延伸畸形等不同的畸形形态;E2的ECso为0.968μg/mL和LCso为2.834μg/mL;当TBC与E2联合暴露时,在120hpf TBC可以减少因E2暴露而引起的胚胎死亡(P<0.05),且会抑制因E2暴露而引起的体内VTG及ER-α基因的表达上调(P<0.01),在一定程度上可抑制雌激素对斑马鱼胚胎的毒性效应,对生物体有潜在的抗雌激素效应的内分泌干扰作用。综上所述,TBC会影响成年雌性斑马鱼的产卵能力并破坏雄鱼的精子超微结构导致雄鱼精子畸形,对斑马鱼的生殖能力具有一定的毒性作用,会干扰斑马鱼的内分泌;且会抑制斑马鱼胚胎的发育并造成胚胎发育的畸形,是需引起人类重视的化学污染物。