论文部分内容阅读
目的制备细胞免疫酶法（Immunoenzymatic Assay,IEA）试剂盒检测血清EB病毒（Epstein-Barr Virus,EBV）IgA-VCA和IgA-EA,通过和酶联免疫吸附法试剂（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）比较,评估采用细胞免疫酶法试剂检测血清EBV IgA-VCA和IgA-EA在鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinoma,NPC）诊断中的价值。方法通过培养B95-8细胞和Raji细胞,用台盼蓝排斥试验检测细胞的活力,分别用B95-8细胞和Raji细胞制成EB病毒衣壳抗原（Virus Capsid Antigen,VCA）生物载片和EB病毒早期抗原（Early Antigen,EA）生物载片,并和卫生部上海生物制品研究所提供的细胞片比较细胞的阳性表达率。然后通过辣根过氧化物酶标记抗体及酶染色底物溶液的制备建立免疫酶法检测血清EB病毒IgA-VCA和IgA-EA。辣根过氧化物酶标记抗体的最适工作浓度用方阵法来确定。收集177例鼻咽癌患者和90例健康体检者的血清,用欧蒙ELISA法试剂和免疫酶法试剂检测其血清IgA-VCA和IgA-EA,同时用国产深圳康生保ELISA法试剂检测血清IgA-VCA,并对两种检测方法的检测结果进行比较。结果培养的细胞经台盼蓝染色B95-8细胞存活率为96%,Raji细胞存活率为92%;B95-8细胞VCA阳性表达率为40%,Raji细胞EA阳性表达率为35%;经实验对比,卫生部上海生物制品研究所提供的细胞片:B95-8细胞表达率为41%,Raji细胞表达率为34%。制备的HRP标记的抗人IgA酶标抗体最适工作浓度为1:40。用欧蒙ELISA法试剂检测177例鼻咽癌患者血清EB病毒IgA-VCA的灵敏度为67.23%,深圳康生保ELISA法试剂为64.97%,两者之间用配对设计的x2检验比较差别无统计学意义（x2=0.35,P=0.557）,而免疫酶法试剂为92.09%,与欧蒙ELISA法试剂和康生保ELISA法试剂差别均有统计学意义（x2=35.85,P＜0.001;x2=37.16,P＜0.001）。用三种试剂检测90例健康对照者血清EB病毒IgA-VCA时,其特异性分别为:欧蒙ELISA法试剂为95.56%,康生保ELISA法试剂为96.67%,免疫酶法试剂为88.89%,两两之间差别均无统计学意义（精确x2,P＞0.05）。用欧蒙ELISA法试剂检测177例鼻咽癌患者血清EB病毒IgA-EA的灵敏度为58.76%,免疫酶法试剂为68.36%,用配对设计的x2检验比较两者差别有统计学意义（x2=13.47,P＜0.001）,用免疫酶法试剂和欧蒙ELISA法试剂检测90例健康对照血清的特异性分别是98.89%和100%,差别无统计学意义（P＞0.05）。结论自制的细胞免疫酶法试剂用于检测血清EB病毒IgA-VCA和IgA-EA效果良好。免疫酶法试剂检测血清EB病毒IgA-VCA和IgA-EA诊断鼻咽癌的敏感性比酶联免疫吸附法试剂要高,特异性两者之间没有差别。免疫酶法试剂检测血清EB病毒IgA-VCA敏感性高,特异性低;而免疫酶法试剂检测血清EB病毒IgA-EA敏感性低,特异高。用免疫酶法试剂同时检测血清EB病毒IgA-VCA和IgA-EA对诊断鼻咽癌有重要的意义。