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活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative,简称LYCD)是酵母细胞在人为控制的伤害条件下产生的具有促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质,有重要的医用和美容价值。 本文对酿酒酵母氧化应激反应活性衍生物进行了初步研究,确定了H2O2刺激酿酒酵母产生高活性LYCD的条件;对LYCD中两种重要的抗氧活性成分——还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)在氧化应激反应中的含量及活力的变化进行了研究,对LYCD中的应激蛋白进行了电泳分析。另外,本文还对酿酒酵母在紫外线照射条件下所产生的LYCD进行了初步的研究。 本文通过对酵母细胞破壁方法的研究,确定了液氮法为酵母细胞的破壁方法,其破壁率可达80%左右。通过对瓦勃氏呼吸法和紫外分光光度法进行比较,确定了紫外分光光度法为检测LYCD活性的一种简便适宜的方法。通过对实验菌株的筛选,确定酿酒酵母TQ22015为制备LYCD的实验菌株。通过单因素实验及正交实验,确定了产生高活性LYCD的最佳条件为:H2O2的作用浓度为0.2mmol/L,作用时间为15min。 对H2O2刺激所产生LYCD中GSH含量和SOD活力进行测定的结果表明:经H2O2刺激,酿酒酵母细胞中GSH含量和SOD活力均高于正常细胞中的水平;H2O2刺激15min,所产生LYCD中SOD的比活力最强;H2O2刺激30min,GSH的含量最高,说明不同的应激产物产生的最佳时间不完全相同。 SDS-PAGE凝胶电泳和二维凝胶电泳实验结果表明:在H2O2的作用下,酵母细胞发生应激反应,蛋白的表达发生了变化:合成了一些新的蛋白质,同时又有某些蛋白的合成受到了抑制。 对紫外线照射或H2O2刺激引起的酵母细胞的应激反应的初步研究表明:尽管这两种应激反应在反应机理上可能存在着差异,但其产生的LYCD却具有相似的生物活性,并都能引起GSH含量和SOD活力的增高,说明这两种应激反应具有一定的相关性。