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大豆是世界范围内重要的经济作物,也是我国最重要的粮食作物与经济作物之一,关系到我国粮食安全战略性布局,同时大豆的产量与品质也与大众的生活息息相关。近年来,全球气候变化加剧,我国严寒、高温、干旱、洪涝灾害频发,同时自然灾害会连锁引发一系列病虫灾害,生物胁迫与非生物胁迫共同威胁着大豆的产量与品质。因此,通过遗传学、分子生物学等微观层面研究植物响应胁迫机制,并鉴定重要基因的功能,然后利用生物技术手段提高大豆的抗病抗逆性及品质,对保证我国大豆产业健康发展起着重要作用。本文先以大豆(Glycine max)为材料,研究了大豆胞囊线虫(Soybean cyst nematode,SCN)诱导相关基因NIG(Nematode induced-gene)的启动子受大豆胞囊线虫的诱导启动情况,初步鉴定出受大豆胞囊线虫特异性诱导启动的启动子,对大豆胞囊线虫抗性相关机理研究与大豆胞囊线虫抗性转基因品种培育起到积极的作用。另外以大豆(Glycine max)为材料,运用amiRNA(Artificial microRNA)及VIGS(Virus-induced gene silencing)基因沉默技术研究GmExo70J、Gm WRP1基因与大豆根瘤及大豆叶片衰老的关系,为提高大豆的产量与品质有着积极的现实意义。所得主要结果有: 1.筛选出受大豆胞囊线虫特异性诱导的启动子 NIG基因受大豆胞囊线虫的诱导表达量会有所上调,所以NIG基因有可能与大豆胞囊线虫的抗性具有相关性。利用Promter-GUS融合方法指示启动子的受诱导情况,通过发根农杆菌介导获得NIG Promoter-GUS发状根,接种大豆胞囊线虫5/10天后与对照比较,筛选出NIG7 Promoter、NIG13Promoter受大豆胞囊线虫特异性诱导启动。 2.发现了GmExo70J、GmWRP1能够促进大豆结瘤利用AmiRNA(Artificial microRNA)技术沉默GmExo70J、GmWRP1的表达,通过发根农杆菌介导获得GmExo70J、GmWRP1-amiRNA发状根,接种根瘤菌30天后,与对照比较发现GmExo70J7、GmExo70J9、GmWRP1-amiRNA发状根单位质量的根瘤数显著减少,说明GmExo70J、GmWRP1会促进大豆结瘤。 将GmExo70J7、GmExo70J9的Promoter与GUS融合,通过发根农杆菌介导获得GmExo70J7、GmExo70J9 Promoter-GUS发状根后,接种根瘤菌3天后与对照比较,发现接种根瘤后GmExo70J7、GmExo70J9 Promoter的启动受到显著的抑制。说明过多的根瘤会拮抗GmExo70J7、GmExo70J9 Promoter的启动,从而一定程度上抑制根瘤的产生,通过负反馈调节机制使根瘤数量处在稳态水平。 3.发现了GmExo70J7、GmExo70J8能够延缓大豆叶片衰老 利用Virus induced gene silencing(VIGS)技术,通过基因枪介导沉默GmExo70J的表达,降低大豆植株GmExo70J的转录丰度,发现GmExo70J7、GmExo70J8-VIGS植株与对照相比叶片显著变黄,出现明显的早衰现象,说明GmExo70J7、GmExo70J8能够延缓大豆叶片的衰老。