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目的明确黄连对朱砂致大鼠肾毒性具有配伍减毒作用,初步探究黄连与朱砂伍用可能减轻其肾毒性的物质基础及作用机制,为解释含朱砂组方的科学性提供理论依据。方法实验选用30只健康SD雌性大鼠(130~160 g),随机分为6组,即对照组、黄连组、朱砂组、黄连朱砂组、小檗碱朱砂组、黄连碱朱砂组,每组5只,分别以0.5%羧甲基纤维素钠(Carboxy methylcellulose sodium,CMC-Na)、3.33 g/kg黄连、1.00 g/kg朱砂、1.00 g/kg朱砂+3.33 g/kg黄连、1 g/kg朱砂+0.23 g/kg小檗碱、1.00 g/kg朱砂+0.08 g/kg黄连碱对大鼠进行灌胃,每天一次,连续给药12周,建立各组模型。实验期间,每周称体重两次,根据体重调整给药剂量,每天观察大鼠的行为活动、饮水饮食、外观体征、排泄物等一般情况。给药12周结束后当日,将大鼠单只放入代谢笼,禁食不禁水,收集24 h尿液,次日大鼠充分麻醉后,取全血、摘取肾脏。采用赛曼原子吸收汞分析仪测定血汞、肾汞、尿汞含量;全自动生化分析仪检测肾功能指标血肌酐(Serum Creatinine,SCr)、血尿酸(Blood Uric Acid,BUA);制作病理切片,苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Eosin staining,HE)、马松三色染色(Masson),光镜下观察肾组织的病理改变;采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative,q-PCR)检测肾组织中细胞因子肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)的基因表达水平;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测肾组织中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的分泌水平。数据以x±s表示,SPSS19.0统计软件分析,多组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)或重复测量方差分析(Repeated Measures),组间两两比较,方差齐时用S-N-K法分析,方差不齐时用Dunnett’s T3法分析,药物间的交互作用采用2×2析因设计方差分析,检验水准α=0.05。结果1、一般情况,实验期间各组大鼠体重正常增长,差异无统计学意义。朱砂组、黄连朱砂组、小檗碱朱砂组、黄连碱朱砂组大鼠粪便呈红色;黄连组与黄连朱砂组大鼠粪便稀薄,其他各组大鼠粪便形状未见明显异常。2、连续给药12周后,朱砂组大鼠血汞、肾汞、尿汞含量明显高于对照组和黄连组,差异有统计学意义(P<0.05),黄连组大鼠的血汞、肾汞、尿汞含量与对照组差异无统计学意义。黄连与朱砂配伍使用对大鼠的血汞、肾汞、尿汞含量存在交互效应。三个配伍组即黄连朱砂组、小檗碱朱砂组、黄连碱朱砂组的血汞、肾汞、尿汞含量均低于朱砂组,差异有统计学意义(P<0.05)。三个配伍组的血汞、肾汞含量依次为:黄连朱砂组<黄连碱朱砂组<小檗碱朱砂组,各组之间差异均有统计学意义(P<0.05);此三组之间尿汞含量差异无统计学意义。3、连续给药12周后,朱砂组大鼠SCr高于对照组和黄连组,差异有统计学意义(P<0.05),与三个配伍组之间差异无统计学意义。朱砂组大鼠BUA高于对照组和黄连组,差异有统计学意义(P<0.05);黄连朱砂组、黄连碱朱砂组BUA水平低于朱砂组,差异有统计学意义(P<0.05),小檗碱朱砂组与朱砂组相比差异无统计学意义;黄连碱朱砂组与黄连朱砂组之间差异无统计学意义。析因方差分析结果显示,服用朱砂对大鼠SCr、BUA水平有影响,服用黄连对大鼠体内SCr、BUA水平没有影响,黄连与朱砂伍用对大鼠SCr、BUA水平存在交互效应。4、连续给药12周,病理染色结果显示,朱砂组可见大量炎细胞浸润,局部胶原纤维增生,部分肾小管消失,可见蛋白管型,髓质偶见小筛网;黄连组上皮细胞空泡化,偶见蛋白管型,未见胶原纤维增生;黄连朱砂组、小檗碱朱砂组、黄连碱朱砂组偶见炎细胞浸润,部分肾小管消失,偶见蛋白管型,轻微胶原纤维增生。纤维增生程度评分结果显示,朱砂组高于对照组和黄连组,差异有统计学意义(P<0.05);三个配伍组纤维增生程度评分均低于朱砂组,差异有统计学意义(P<0.05);与黄连朱砂组相比,小檗碱朱砂组、黄连碱朱砂组纤维增生程度评分升高,差异有统计学意义(P<0.05)。5、连续给药12周,朱砂组大鼠肾组织中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10基因表达水平高于对照组和黄连组,差异有统计学意义(P<0.05)。与朱砂组相比,三个配伍组的促炎细胞因子TNF-α、IL-1β基因表达下调(P<0.05),三个配伍组之间差异无统计学意义。与朱砂组相比,黄连朱砂组、黄连碱朱砂组抗炎细胞因子IL-4基因表达上调(P<0.05),小檗碱朱砂组与朱砂组之间差异无统计学意义,黄连碱朱砂组IL-4基因表达水平低于黄连朱砂组(P<0.05)。与朱砂组相比,黄连朱砂组大鼠肾组织抗炎细胞因子IL-10基因表达水平上调(P<0.05),小檗碱朱砂组、黄连碱朱砂组与朱砂组之间差异无统计学意义。析因方差分析结果显示,服用朱砂对大鼠肾脏组织细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10基因表达水平均有影响;服用黄连对大鼠肾脏组织细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4基因表达水平均有影响,对大鼠肾脏组织细胞因子IL-10基因表达水平没有影响;黄连与朱砂伍用,对大鼠肾脏组织细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4基因表达水平存在交互效应,对大鼠肾脏组织细胞因子IL-10基因表达水平不存在交互效应。6、连续给药12周,朱砂组大鼠肾组织中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10分泌水平高于对照组和黄连组,差异有统计学意义(P<0.05)。与朱砂组相比,三个配伍组的TNF-α、IL-1β蛋白表达下调(P<0.05),三个配伍组之间差异无统计学意义。与朱砂组相比,黄连朱砂组、黄连碱朱砂组IL-4蛋白表达上调(P<0.05),小檗碱朱砂组与朱砂组之间差异无统计学意义,黄连碱朱砂组与黄连朱砂组之间差异无统计学意义。与朱砂组相比,黄连朱砂组大鼠肾组织IL-10蛋白表达水平上调(P<0.05),小檗碱朱砂组、黄连碱朱砂组与朱砂组之间差异无统计学意义。析因方差分析结果显示,服用黄连、朱砂对大鼠肾脏组织细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10蛋白表达水平均有影响;黄连与朱砂伍用,对大鼠肾脏组织细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10蛋白表达水平存在交互效应。结论长期大量使用朱砂,可引起大鼠肾脏内汞蓄积,造成肾组织损伤。黄连与朱砂伍用能降低朱砂的肾毒性,其主要成分黄连碱和小檗碱是配伍减毒作用的物质基础。黄连减轻朱砂肾毒性的作用机制可能是:减少大鼠血汞吸收,降低肾汞蓄积;下调促炎症细胞因子IL-1β、TNF-α的表达,上调抗炎细胞因子IL-4、IL-10的表达。