背景:结直肠癌（CRC）的术后复发和转移导致患者预后不良,亟需开发一种安全有效的术后治疗策略。免疫治疗由于毒副作用小、能靶向杀死肿瘤、生成免疫记忆响应,得到越来越多的关注。此外,近年研究发现,长非编码RNA浆细胞瘤变异异位基因1（Pvt1）介导CRC的发生发展和肿瘤微环境（TME）中的免疫抑制。利用纳米技术负载药物能有效提高其生理稳定性和进胞效率,更重要的是,仿生纳米粒子不仅具有同源靶向性而且含有肿瘤相关抗原（TAAs）以激活抗肿瘤特异性免疫响应。基于此,本研究开发了一种搭载靶向lnc RNA Pvt1的仿生纳米粒子的生物支架介导三重免疫响应以抑制CRC术后复发和转移。方法:为了制备该生物支架,首先以Pvt1为靶点设计并构建针对Pvt1的短发夹RNA质粒（记为“shPvt1”）,随后提取小鼠CRC细胞系CT26细胞的细胞膜（记为“CM”）。通过将shPvt1、CM、（2,3-二油酰基-丙基）-三甲胺（DOTAP,记为“D”）与胆固醇共混自组装并反复膜挤压得到纳米粒子shPvt1-CM-D。进一步,将shPvt1-CM-D与化疗药物奥沙利铂（记为“Oxa”）共同包裹于基于海藻酸钠（OA）和透明质酸（HA）的水凝胶中,制得生物支架shPvt1-CM-D/Oxa@gel。之后,通过透射电镜和扫描电镜对该支架进行形貌表征,并用原子吸收光谱、荧光标记示踪实验检测支架搭载药物的释放速率。为了验证该生物支架所介导的三重免疫响应,分别进行了流式分析、ELISA分析和细胞共培养实验,以检测肿瘤细胞中损伤相关分子模式（DAMPs）的释放、骨髓来源树突状细胞（BMDCs）表面CD80/CD86的表达以及粒细胞髓源抑制细胞（G-MDSC）对T细胞免疫抑制的缓解。最后在小鼠体内构建了CRC术后原位复发模型、术后异位二次侵袭模型、异时性肝转移模型和术后同时性远处转移模型,并将该生物支架移植于手术部位,以探究其对CRC术后复发和转移的抑制效果。结果:合成可高效搭载shPvt1的仿生纳米粒子shPvt1-CM-D（直径约270 nm）,并将其包裹于OA/HA的水凝胶支架中。该生物支架在体内条件下可缓慢降解,并持续释放Oxa和shPvt1-CM-D分别达5天和10天,以介导三重免疫响应重塑TME:1)shPvt1-CM-D增强了Oxa诱导的免疫原性细胞死亡（ICD）作用,进一步促进了肿瘤中钙网蛋白（CRT）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的释放;2)shPvt1-CM-D与Oxa联合增强的ICD与CM中的TAAs共同刺激DCs,促进其表面CD80/CD86的上调与TNF-α、IL-6的分泌;3)shPvt1-CM-D抑制了G-MDSCs中活性氧（ROS）与精氨酸酶（Arg）的分泌,削弱了其诱导的T细胞耗竭。在动物实验中,与Oxa@gel,CM-D@gel和shPvt1-CM-D@gel组相比,shPvt1-CM-D/Oxa@gel组小鼠原位复发肿瘤得到最显著的抑制,且8只小鼠中有5只在60天时仍未观察到肿瘤复发,生存率达62.5%。同时,shPvt1-CM-D/Oxa@gel可诱导小鼠产生特异性免疫记忆,抵御CRC的再次侵袭,尤其是异时性肝转移。另外,shPvt1-CM-D/Oxa@gel还可通过激活系统性免疫响应抑制同时性远处转移。结论:本研究成功构建了一种搭载靶向lnc RNA Pvt1的仿生纳米粒子的生物支架,可有效地抑制CRC术后原位复发及远处转移,为靶向lnc RNA的CRC术后免疫治疗提供新思路。