论文部分内容阅读
【目的】旨在分析散发性前庭神经鞘膜瘤NF2基因突变类型或基因状态对肿瘤临床生物学行为的影响及潜在机制,从而更为深入探讨NF2基因病理状态在肿瘤发生和发展中的作用,并提供可能预测肿瘤临床特性的分子指标。【方法】1.收集40例散发性VS组织及血液样本,患者性别,年龄,首发临床症状,肿瘤侧别,发病年限,肿瘤大小,术前面神经功能,术前听力水平,术前影像学等临床资料完整;2.采用PCR扩增直接测序及MLPA方法检测散发性VS组织中NF2基因点突变、外显子缺失及基因拷贝数变化,并分析不同NF2基因突变情况患者临床特点差异;3.采用Realtime PCR和Western blotting方法检测NF2基因mRNA及merlin蛋白的表达情况,通过与基因检测结果的关联性分析,明确不同肿瘤的基因型之间存在差异性;4.采用MSP方法检测散发性VS中NF2基因启动子甲基化情况,同时采用Western blotting检测merlin蛋白S518位点磷酸化水平,探讨NF2基因突变之外可能的发病机制;5.通过NF2基因型/merlin表达与病例临床资料的对比分析,探讨NF2基因状态对肿瘤临床行为的影响,并通过关键信号蛋白(如p53,cyclin D1,BAX,Bcl-2和caspase 3)的表达分析,揭示该影响的可能分子学机制;6.通过正常神经鞘膜细胞慢病毒转染NF2基因沉默模拟听神经瘤发生或发展过程中的细胞增殖和失调信号变化,进一步明确在肿瘤发展过程中NF2基因状态的变化对肿瘤细胞生长的影响及机制。【结果】1.40例散发性VS中65%检测出NF2基因点突变,42.5%检测出NF2基因外显子杂合性缺失。42.5%的肿瘤组织为NF2基因两次打击失活,25%组织为NF2基因一次打击失活,仅32.5%肿瘤组织两种方法均未检测到NF2基因改变;2.存在NF2基因改变的肿瘤组织生长指数较无突变组织大,余临床表现无显著差异;NF2基因外显子2、3存在突变的患者较无突变的患者平均发病年龄小,提示肿瘤表型较为严重;3.散发性VS肿瘤组织中未检测到NF2基因启动子甲基化,蛋白磷酸化作为翻译后修饰的异常同样能导致少数听神经瘤的发生;4.NF2基因突变组织中,merlin、p53蛋白表达显著下调,cyclin D1表达显著上调,BAX和Bcl-2表达下调,但BAX/Bcl-2比值及活化型caspase 3在不同NF2基因突变情况肿瘤组织中无明显差异;5.NF2基因沉默能够导致p53表达下调,cyclin D1表达显著上调,促进HSC细胞增殖,使G1期细胞比率减少,细胞周期由G1期向S期推进。【结论】1.散发性VS中NF2基因突变十分常见,第一次打击常为点突变,第二次打击通常表现为另外一个正常基因拷贝缺失(LOH);NF2基因改变与临床表现具有一定相关性,NF2基因突变的肿瘤组织生长较快,NF2基因外显子2、3突变提示患者肿瘤表型较重;2.散发性VS中NF2基因启动子甲基化十分少见;merlin蛋白S518位点磷酸化在部分无NF2基因改变肿瘤组织中通过抑制merlin蛋白功能促进肿瘤生长;3.不同NF2基因状态介导的merlin-p53-cyclin D1周期调控级联信号的改变,调控细胞增殖周期,可能解释不同肿瘤在发展过程中生长趋势的差异性。