猪囊尾蚴特异性候选诊断标识的筛选

来源 :内蒙古民族大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:feijj2002_99
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猪囊尾蚴病(Cysticercus cellulosae)是由猪带绦虫(Taenia sodium)的幼虫寄生人或猪等宿主体内而引起的一种重要人畜共患寄生虫病。当前猪囊尾蚴病的诊断较为困难,其根本原因在于缺乏有效诊断标识的挖掘,特别是适用于早期免疫学诊断标识的筛选。  本研究利用Shotgun技术鉴定猪囊尾蚴囊液蛋白组分构成,筛选特异性候选诊断标识并分析囊液蛋白组分的功能。采用shotgun液相色谱-串联质谱系统对囊液进行分选与鉴定,分别经Blast2go软件进行比对和注释,基因本体(GO)对注释的蛋白质组数据分析,京都基因和基因组百科全书(KEGG)进行富集分析和STRING绘制蛋白质相互作用(PPI)网络图。结果显示:共筛选到158种已知蛋白,初步确定GP50、小热休克蛋白、8KDa糖蛋白和烯醇化酶等为候选诊断特异性抗原,所获蛋白多为低分子量蛋白质。GO分析表明,蛋白质的分子功能主要以催化活性和结合功能为主。通路富集分析表明,已知蛋白主要富集于PI3K-Akt和糖酵解/糖异生信号通路。PPI蛋白相互作用网络中的节点主要是糖代谢酶。  利用抗体芯片技术高通量筛选猪囊尾蚴虫体和囊尾蚴患者血清与健康人血清差异表达蛋白。提取虫体及血清蛋白质,进行SDS-PAGE电泳及灰度分析,采用Biotin对各组分蛋白进行标记,通过Western-blot对标记效率进行验证,标记后的各组分蛋白与芯片进行杂交反应,对芯片产生的荧光强度进行扫描以获取原始数据,通过R语言进行差异表达分析,按照差异程度进行排序,对差异程度较大的前27个抗体进行验证。结果表明提取的各蛋白质组均具有明显的条带,Biotin标记效率良好,通过芯片扫描及差异表达分析,获得差异程度较为明显的抗体共271个,通过对其中前27个抗体进行验证,发现6个差异显著或差异极显著的抗体。  利用Shotgun技术初步确定所获蛋白多为候选诊断特异性抗原,利用抗体芯片技术筛选出六个差异显著或差异极显著的抗体。
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