天然抑菌成分的筛选及机理应用研究

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本论文根据文献以及民间经验,选用了20种中草药用10:1的比例水提取物,用平板法测试中草药水提取物溶液的对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌活性,用试管二倍稀释法,在浓度为6.25~200mg/mL测试中草药水提取物对黑曲霉、拟青霉、啤酒酵母、假丝酵母的最低抑菌浓度,以及测试各提取物在浓度为50mg/mL培养基中测试黑曲霉霉菌孢子萌发抑制率的大小,从二十种中草药中筛选出抑菌效果较好和抗菌谱较宽的苦参、黄芩、半枫荷、葛根四种提取物,其中苦参提取物以及黄芩提取物的抑菌效果最好。利用初步筛选的四种中草药提取物进行1:1:1配伍,组成复方,测试了4种复方的MIC(最低抑菌浓度)值,其中FF-01综合抑菌效果最好。对黄芩提取物(DF)和复方FF-01(FF)的理化性质做了初步研究,复方FF对黑曲霉菌在对温度、湿度、药效持续时间和保存时间测试上均优于单一提取物,两种提取物最佳抑菌pH为6。提取物适合在80℃以下保存,在100℃下,温度对复方的影响不显著,光照对于两种提取物的抑菌效果均不显著。 对黄芩中的主要药效成分黄芩苷进行了分离,随着提取物不断的被纯化,其抑菌活性不断提高,制得黄芩苷结晶的活性最好,提取后残留物基本上没有抑菌活性,自制的黄芩苷结晶与对照的紫外扫描图基本吻合,HPLC分析,提取物DF以及配伍液FF-1在吸脱时间为40min都有一个明显得特征峰,说明两种提取物中黄芩苷都是存在的,复方FF-1中黄芩苷没有与其他物质发生反应生产新的活性物质,而是作为一种活性成分而存在。 大肠杆菌经苦参总碱和黄芩苷处理后,细胞内物质渗漏(A260)起初迅速增加,而后增加速度减慢,直至110min,而对于苦参总碱和黄芩苷处理的金黄色葡萄球菌,A260开始也是迅速地增加的, 60min后增加基本停止,这是由于分裂期细胞与细嫩细胞膜被破坏造成的。加入黄芩苷后,菌体蛋白质组成发生了较大的变化,菌体内某些蛋白质的氨基酸组成的正常平衡与比例被改变,使其生理活性受到抑制,甚至发生变化。可以认为,受到改变的可能是微生物呼吸代谢EMP途径中磷酸甘油醛脱氢酶和TCA循坏中琥珀酸脱氢酶等呼吸酶系,从而使微生物呼吸代谢受到抑制,其生长发育也就被抑制。此外加入黄芩苷后,菌体细胞中游离氨基酸总含量增加,说明菌体发生了部分的自溶作用。可能是黄芩苷抑制菌体微生物呼吸代谢中有关酶系的正常合成,从而促使它们游离和分解,部分菌体受到抑制,甚至死亡,从上述的分析得出,由于黄芩苷抑制了菌体有关呼吸代谢酶类的正常合成代谢,从而使其生命活动受到抑制而死亡。 通过比较典型呼吸抑制剂对苦参总碱的叠加率可知,苦参总碱与磷酸钠混合作用时重叠最大,为39.26%,其次是丙二酸,最后才是碘乙酸,推断苦参总碱的抑菌机理:通过抑制HMP酶系活性而抑制生物呼吸作用,导致为机体提供核酸、辅酶、维生素等生物合成所必须的戊糖。 对单方以及复方提取物溶液在水果保鲜中的应用进行了研究,表明两种提取物对果蔬均有明显得保鲜效果。保鲜试验结果表明,保鲜液在45天后,保鲜效果下降明显,这与筛选试验得出的提取物保存时间相符。
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