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呋喃唑酮属于硝基呋喃类抗菌药，因其效高价廉，广泛应用在畜禽和水产养殖业。呋喃唑酮原药在体代谢迅速，在动物体内很快就代谢为3﹣氨基﹣2﹣恶唑烷酮，代谢物可长期存在。多年来研究证明呋喃唑酮代谢物具有较强的致癌、致畸、致突变作用。呋喃唑酮代谢物在动物性食品中的残留问题对人类健康造成威胁，导致世界各国禁止使用。目前很多国家已经建立了呋喃唑酮代谢物残留的检测方法，HPLC、LC-MS及LC-MS/MS是用来检测呋喃唑酮代谢物的常用方法，但在实际操作中需要高档仪器，且前处理复杂、时间长，成本高，需要专业人员操作、不易普及。而酶联免疫吸附法（ELISA）测定的基础是抗原抗体反应，具有快速，灵敏、操作简便、检测成本低廉等优点，有着广阔的前景。本研究旨在建立呋喃唑酮代谢物（AOZ）的间接竞争酶联免疫吸附检测方法，针对呋喃唑酮代谢物研制一种快速检测的试剂盒。本实验首先确定了合成呋喃唑酮代谢物AOZ最佳条件，针对AOZ结构特点设计四种衍生物，并进行鉴定。使用活性酯化法和戊二醛法与载体蛋白卵清蛋白偶联，成功合成四种免疫原（免疫原I、II、III和IV）。同时，用相同方法偶联合成四种包被原（包被原A、B、C和D）。分别进行紫外扫描，证实人工抗原合成成功。采用免疫原免疫2只新西兰大白兔，按照免疫程序免疫后，将纯化后的抗血清分别与多种包被抗原进行交叉测定，最终经筛选选用B包被原和8号抗体分别作为ELISA检测用的包被原和抗体。对ELISA法进行优化，结果表明合适ELISA条件：抗体稀释4K倍、包被原稀释500倍、酶标二抗稀释2K倍，以pH9.6CB缓冲液包被液，4℃过夜包被金灿华酶标板，1%BSA的PBST缓冲液封闭，一抗反应30min，显色15min。优化后建立ELISA法得到NPAOZ标准曲线线性范围为0.25~10ng/mL，线性关系良好； IC500.8162ng/mL。水产品和畜禽组织最低检测限约为0.04ng/mL和0.08ng/mL，肝脏和鸡蛋最低检测限约为0.1ng/mL，奶样最低检测限约为0.06ng/mL；样本添加回收率在80%~120%范围内；批内批间系数均小于20%，均都达到兽药残留分析规定。抗体除了与CPAOZ、CPAHD有一定交叉反应外，与类似物和衍生试剂都无交叉反应。实验证明高温短时间衍生化与37℃温育过夜效果相当，提高样本处理效率。试剂盒分别密封保存于4℃和37℃一段时间后做稳定性测试，结果表明在4℃条件下试剂盒放置12个月，可保持检测结果的可靠性。