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[目的]
心肌细胞凋亡是心血管疾病发生和发展的重要原因,胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factors1,IGF-1)可以保护心肌细胞免于凋亡。本课题组进一步研究发现,IGF-1可以通过下调细胞色素c家族成员的表达。由于细胞色素c是参与线粒体代谢的主要成员,本实验旨在观察IGF-1对于处于诱导凋亡条件下心肌细胞线粒体形态、膜通透性和膜电势等的影响,观察是否可以通过下调细胞色素c家族的相关成员的基因表达,从而改善诱导凋亡状态下的心肌细胞的线粒体功能。对心肌细胞的凋亡机制做出重要的补充,为心脏病的防治提供新的依据。
[方法]
(1)体外培养乳鼠原代心肌细胞;
(2)用半定量、定量PCR法及westernblot法观察IGF-1对CYP11A1、CYP2E1基因水平和蛋白水平的影响;
(3)利用siRNA技术下调CYP2E1、CYP11A1基因表达,用JC-1线粒体膜电位检测法、透射电镜观察被诱导凋亡的心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变,用AnnexinV-FITC/PI双染色法、Hoechst33258、Caspase-3、TUNEL等检测方法观察心肌细胞凋亡的改善情况。
[结果]
(1) IGF-1能够明显改善心肌细胞凋亡的情况;
(2) IGF-1可以下调心肌细胞中CYP11A1、CYP2E1基因的表达;
(3)特异性下调CYP11A1、CYP2E1后,心肌细胞线粒体膜电位明显下降率下降(P<0.05),线粒体形态明显改善,caspase-3酶活性降低(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.05),与IGF-1抗心肌细胞凋亡效应相似。
[结论]
(1) IGF-1能够明显改善心肌细胞凋亡的情况;
(2)IGF-1可以下调细胞色素C家族成员CYP11A1、CYP2E1的表达,特异性沉默细胞色素C家族成员CYP11A1、CYP2E1可以改善心肌细胞凋亡的情况;
(3) IGF-1可能通过下调CYP11A1、CYP2E1的表达改善线粒体功能保护心肌细胞免于凋亡。