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目的:
利用单纯性肝囊肿动物模型,探讨博莱霉素硬化治疗后的组织病理学改变,揭示博莱霉素致硬化机制,为囊肿性疾病的博莱霉素硬化治疗提供理论基础。
材料与方法:
32只新西兰兔随机分为空白对照组4只与实验组28只;实验组按照接受博莱霉素硬化治疗后不同的观察时间分为1天、7天、14天、28天、42天、56天、84天共计7组,每组各4只。结扎家兔胆囊管而保留胆囊动静脉,以7号穿刺针从胆囊颈部远离胆囊血管部位进针穿刺进入胆囊腔,先行抽尽胆汁,再以生理盐水反复冲洗至液体清亮,同时注意是否漏液。实验组28只兔抽尽冲洗液后注入博莱霉素溶液(药物浓度2mg/mL,用量0.5mL)。空白对照组4只兔抽尽囊内冲洗液后注入0.5mL的生理盐水。实验组各组分别于术后第1天、7天,14天、28天、42天、56天、84天处死;对照组于术后第14天处死。手术摘除胆囊取材。
采用HE染色观察囊壁上皮细胞组织病理学的动态变化,应用Masson三色染色法观察囊壁胶原纤维的动态变化和分布特点,采用CD20、CD45和CD68免疫组化法观察囊壁炎性细胞浸润类型及其分布特征。使用NikonEclipseTi(配NIS-Elements成像分析软件)进行图像拍摄与采集,采用ImageProPlus7.0软件测定囊腔内胶原纤维占比和黏膜下层免疫组化染色阳性反应的积分光密度,以均数±标准差(Mean±SD)表示。采用SPSS软件包进行分析,以P<0.05表示有统计学意义。
结果:
空白对照组囊壁上皮细胞结构完整,细胞质丰富,固有层排列紧密,未见胶原纤维渗出及各类炎症细胞浸润。实验组第1天组黏膜上皮肿胀坏死,固有层水肿,黏膜下层大量炎细胞浸润,各项免疫组化(CD20、CD45、CD68)染色积分光密度较对照组高(P<0.01),固有层少量胶原纤维形成。第7天组胆囊黏膜脱落、崩解,固有层水肿明显,伴有炎细胞浸润,各项免疫组化染色积分光密度较第1天组低(P<0.01);囊壁内胶原纤维占比达58.98±3.05%,较第1天组显著增多(P<0.01)。第14天至第84天组,炎细胞不断减少,炎症反应逐步减轻,同时壁内胶原纤维含量逐步下降,各项免疫组化染色积分光密度及胶原纤维占比皆较前组低(P<0.01)。第84天组胆囊黏膜被排列紧密的单层扁平细胞取代,固有层结缔组织疏松。
结论:
(1)以结扎胆囊管而保留胆囊动静脉的胆囊作为单纯性肝囊肿的动物模型是可行的,具有较高的可靠性、可操作性、可重复性。
(2)局部给予博莱霉素后,囊壁黏膜上皮在早期即出现坏死,进而脱落、崩解,同时伴随黏膜下结缔组织水肿和炎性细胞浸润,并在治疗后第84天由连续单层扁平上皮细胞取代。
(3)博莱霉素使囊壁黏膜下层发生非特异性炎症,包括B淋巴细胞、T淋巴细胞及巨噬细胞在硬化治疗第1天即达到高峰;随着时间推移,各类炎症反应程度逐步减轻并最终消失。
(4)博莱霉素使囊壁黏膜下层产生成纤维细胞,进而产生大量胶原纤维进入囊壁内,并于治疗后第7天达到顶峰;随时间推移,囊内胶原纤维含量逐步下降至消失。
利用单纯性肝囊肿动物模型,探讨博莱霉素硬化治疗后的组织病理学改变,揭示博莱霉素致硬化机制,为囊肿性疾病的博莱霉素硬化治疗提供理论基础。
材料与方法:
32只新西兰兔随机分为空白对照组4只与实验组28只;实验组按照接受博莱霉素硬化治疗后不同的观察时间分为1天、7天、14天、28天、42天、56天、84天共计7组,每组各4只。结扎家兔胆囊管而保留胆囊动静脉,以7号穿刺针从胆囊颈部远离胆囊血管部位进针穿刺进入胆囊腔,先行抽尽胆汁,再以生理盐水反复冲洗至液体清亮,同时注意是否漏液。实验组28只兔抽尽冲洗液后注入博莱霉素溶液(药物浓度2mg/mL,用量0.5mL)。空白对照组4只兔抽尽囊内冲洗液后注入0.5mL的生理盐水。实验组各组分别于术后第1天、7天,14天、28天、42天、56天、84天处死;对照组于术后第14天处死。手术摘除胆囊取材。
采用HE染色观察囊壁上皮细胞组织病理学的动态变化,应用Masson三色染色法观察囊壁胶原纤维的动态变化和分布特点,采用CD20、CD45和CD68免疫组化法观察囊壁炎性细胞浸润类型及其分布特征。使用NikonEclipseTi(配NIS-Elements成像分析软件)进行图像拍摄与采集,采用ImageProPlus7.0软件测定囊腔内胶原纤维占比和黏膜下层免疫组化染色阳性反应的积分光密度,以均数±标准差(Mean±SD)表示。采用SPSS软件包进行分析,以P<0.05表示有统计学意义。
结果:
空白对照组囊壁上皮细胞结构完整,细胞质丰富,固有层排列紧密,未见胶原纤维渗出及各类炎症细胞浸润。实验组第1天组黏膜上皮肿胀坏死,固有层水肿,黏膜下层大量炎细胞浸润,各项免疫组化(CD20、CD45、CD68)染色积分光密度较对照组高(P<0.01),固有层少量胶原纤维形成。第7天组胆囊黏膜脱落、崩解,固有层水肿明显,伴有炎细胞浸润,各项免疫组化染色积分光密度较第1天组低(P<0.01);囊壁内胶原纤维占比达58.98±3.05%,较第1天组显著增多(P<0.01)。第14天至第84天组,炎细胞不断减少,炎症反应逐步减轻,同时壁内胶原纤维含量逐步下降,各项免疫组化染色积分光密度及胶原纤维占比皆较前组低(P<0.01)。第84天组胆囊黏膜被排列紧密的单层扁平细胞取代,固有层结缔组织疏松。
结论:
(1)以结扎胆囊管而保留胆囊动静脉的胆囊作为单纯性肝囊肿的动物模型是可行的,具有较高的可靠性、可操作性、可重复性。
(2)局部给予博莱霉素后,囊壁黏膜上皮在早期即出现坏死,进而脱落、崩解,同时伴随黏膜下结缔组织水肿和炎性细胞浸润,并在治疗后第84天由连续单层扁平上皮细胞取代。
(3)博莱霉素使囊壁黏膜下层发生非特异性炎症,包括B淋巴细胞、T淋巴细胞及巨噬细胞在硬化治疗第1天即达到高峰;随着时间推移,各类炎症反应程度逐步减轻并最终消失。
(4)博莱霉素使囊壁黏膜下层产生成纤维细胞,进而产生大量胶原纤维进入囊壁内,并于治疗后第7天达到顶峰;随时间推移,囊内胶原纤维含量逐步下降至消失。