副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,p),是弧菌科(Vibrio)弧菌属的杆菌或多形态的革兰氏阴性菌,具嗜盐性,广泛存在于海洋以及河口环境,通过食品传播,是遍布世界的食源性致病菌,人多因食用被本菌污染的生的或未煮熟的海鲜而引起急性胃肠炎发生食物中毒。我国每年都有副溶血性弧菌引起食物中毒的报道,且在食源性致病引发的食物中毒病例中占首要位置,快速检测和流行病学调查有助于该病的控制。传统检测方法存在操作繁琐、检测周期长、成本高等问题,促使以检测特异靶基因为目标的分子检测技术快速发展。目前PCR检测方法大多基于毒力基因或看家基因,存在假阳性和漏检的风险,建立敏感而特异的快速分子检测方法迫在眉睫。本文在对toxRS序列进行系统发育及同源性分析的基础上,发现toxR、toxS均有作为种特异性检测靶基因的可能,故分别设计引物primers-R、primers-S及primers-R-S,优化PCR反应条件建立相应PCR方法,通过对57株副溶血性弧菌和19株亲缘相近菌及食源性致病菌的检测,toxR-S PCR显示出较好的稳定性和特异性,检测极限达2pg基因组DNA。toxR-S PCR方法进一步与国标方法对比验证,通过对359份市场海产品检测,符合率高达95.82%,敏感性100%,特异性92.39%。对两种方法检测阳性差异的15份样品,以其总细菌DNA为模板扩增副溶血性弧菌看家基因,测序比对显示与副溶血性弧菌同源性高达97%以上。表明所建立的方法具有快速、特异、敏感等优点,可广泛用于副溶血弧菌的快速检测。现已有对江苏周边、舟山、上海等地区副溶血性弧菌分子流行病学的报道,但缺乏对华东区域整体的调查分析,而华东地区4省1市临海,是副溶血性弧菌污染的"重灾区",加强对该区域毒力相关基因的分子流行病学方面的调查分析,对防控副溶血性弧菌的大流行性爆发有重要意义。本文对华东地区分离到的Vp进行大流行相关毒力基因的检测和多位点序列分型(MLST)。152株分离株共检出4株致病株(tdh+或trh+),其中2株为可能形成大流行的菌株(tdh+和toeRS/new+)。MTase检出率为1.3%,所有分离株不携带完整的Ⅲ型分泌系统,78.3%的分离株携带全套的Ⅵ型分泌系统。152株Vp分为84个STs,其中新的STs有69个。聚类分析表明一部分环境分离株与临床致病株看家基因进化关系相近,同种类宿主分离株的STs更有可能生成聚类关系,此外,归属于同源复合体CC3并非致病株的必要条件。以系统发育分析为基础,对毒力基因分布图及宿主来源进行归类,发现环境分离株分子特征呈多态性。对华东地区副溶血性弧菌的流行病学研究表明,4个致病株和2个可能引起大流行菌株的检出提示副溶血性弧菌具潜在爆发隐患,而分子特征的多态性为疫情的无规律性散发提供条件,华东地区副溶血性弧菌环境分离株对人们的健康有潜在威胁。