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本文以探索环保的海藻乙醇发酵条件为目的，对以龙须菜为原料发酵乙醇的酸解糊化、酶解发酵工艺进行研究。首先采用稀盐酸对龙须菜进行酸解糊化以增大底物流动性，然后用琼胶酶粗酶液进行酶解并探索了最佳酶解条件，最后通过对比酵母单菌发酵，混合菌发酵与分步酶解发酵三种处理效果，初步探索了以龙须菜为原料，生产生物乙醇的方法及可行性。同时，本文也尝试利用原生质体融合育种技术，筛选能够以龙须菜为原料发酵乙醇的重组菌株。 在本实验筛选到两株琼胶降解能力较强的琼胶降解菌QJ14和Hhjh，并进行16s rDNA分子鉴定，通过NCBI数据库比对，发现QJ14与假交替单胞菌Pseudoalteromonasespejiana NCIMB2127(T)同源性高达100％，初步最终鉴定为Pseudomonadaceae sp.，Hhjh与白色噬琼胶菌 Agarivorans albus MKT106(T)同源性高达99.9%，初步最终鉴定为 Agarivorans sp.。通过对这两株菌进行产酶条件优化，菌株 QJ14的最高酶活达到75.26 U/ml，菌株Hhjh的最高酶活达到138.64 U/ml。 为了提高龙须菜的底物浓度，实验探索了盐酸浓度、酸解时间、酸解温度对龙须菜酸解糊化的影响，证实了在盐酸浓度为0.01 mol/L，121℃条件下反应10 min，就能获得粘度适宜，流动性好的酸解糊化液。用QJ14和Hhjh产生的粗酶液酶解龙须菜酸解糊化液，通过优化酶解条件，最高获得29.33 mg/g还原糖产量。 通过比较酵母单菌发酵，混合菌发酵与分步酶解发酵三种方法的效果，利用顶空气相法（HS-GC法）检测发酵液中乙醇产量，发现单菌发酵和混合菌发酵几乎没有乙醇产生，分步酶解发酵的乙醇产量约为2.36 ml/L。 为了进一步简化发酵工艺，缩短发酵时间，我们尝试用原生质体融合育种技术获得能直接以龙须菜为底物，发酵生物乙醇的新菌株。探索了最佳原生质体制备条件：假交替单胞菌QJ14培养4 h，以SMM为原生质体渗透压稳定液，用0.5 mg/ml的溶菌酶在30℃条件下，酶解40 min，原生质体生成率*再生率达到9.84%；酿酒酵母用2%蜗牛酶培养8h，在37℃条件下，酶解40min，原生质体生成率*再生率为13.92%。以45% PEG-4000为诱导剂，原生质体数按酵母/QJ14为1/100的比例，在30℃下融合10min，4℃孵育60min。融合液涂布含150ug/ml氯霉素与10 ug/ml放线菌酮的筛选平板，连续观察7天，未能获得目的重组菌株，方法技术还有待进一步摸索，但这些研究能为融合育种提供一定参考。