具有胶原结合能力的抗表皮生长因子受体抗体的制备及应用

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肿瘤微环境由基质纤维细胞、免疫细胞、血管与淋巴系统网络和细胞外基质组成,在肿瘤的发生和迁移过程中发挥着重要的作用,细胞外基质中的胶原蛋白是肿瘤微环境的主要成分,在肿瘤发生过程中,肿瘤微环境中的细胞外基质与正常组织中的细胞外基质相比胶原蛋白的表达量明显上调,胶原蛋白(Ⅰ型,Ⅲ型,Ⅳ型,Ⅷ型)作为细胞外基质的主要成分已经被证实在肿瘤的发生和迁移过程中发挥着重要的作用,因此,胶原蛋白成为了肿瘤靶向治疗和制备靶向递送药物载体的重要新靶点。  在本课题中,我们基于Collagen Binding Domain(CBD)已经被证明具有特异的胶原结合能力,将抗肿瘤药物cetuximab抗体进行改造,在酵母中成功表达了CBD-EGFR-scFv和CBD-EGFR-Fab两种不同类型的抗体。将制备的CBD-EGFR-scFv和CBD-EGFR-Fab抗体应用于胶原丰富的肿瘤治疗,并且在体外初步验证了其对神经元DRG分化的影响。  试验结果表明:CBD-EGFR-scFv和CBD-EGFR-Fab不但保留了cetuximab抗体的抗原结合能力和抗肿瘤活性,而且具备了胶原结合能力。在体外的胶原结合试验中CBD-EGFR-scFv和CBD-EGFR-Fab实现了与胶原的特异性结合和缓慢释放,在A431肿瘤动物模型中,CBD-EGFR-scFv和CBD-EGFR-Fab均表现出了迅速靶向肿瘤,在肿瘤内实现缓释的效果,缓释效果优于全长抗体cetuximab;长期治疗的结果表明:CBD-EGFR-scFv和CBD-EGFR-Fab表现出来cetuximab类似的杀伤肿瘤效果。  体外培养DRG的试验结果显示:CBD-EGFR-scFv和CBD-EGFR-Fab与全长抗体cetuximab功能类似,均可以抵消髓鞘蛋白对DRG生长的抑制作用,促进神经元轴突的生长,为我们进一步制备具有生物活性的功能胶原支架材料应用于体内试验奠定了基础。
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