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目的:研究中药香加皮化学成分杠柳苷单独及与TRAIL联合应用对胃癌细胞生长的影响,并探讨其抗肿瘤机制,为其作为抗癌新药开发提供理论依据。方法:1应用MTS法检测香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合处理对胃癌细胞增殖的影响。2应用流式细胞术、TUNEL法和Hochest法检测香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合能否诱导胃癌细胞凋亡。3应用Western blotting实验检测香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合对细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。4应用吖啶橙染色、免疫荧光法检测香加皮杠柳苷是否通过溶酶体凋亡途径诱导胃癌细胞凋亡。5应用基因芯片筛选香加皮杠柳苷对胃癌细胞基因表达谱的影响,并用q PCR法进行验证。6应用Western blotting实验检测香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合对胃癌细胞中ERK1/2通路及其下游EGR1分子表达水平的影响。7应用MTS法检测香加皮杠柳苷处理胃癌细胞后敲低EGR1对胃癌细胞增殖的影响。8应用BALB/c裸鼠移殖瘤模型,检测香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合应用在体内对胃癌细胞增殖的影响。9应用TUNEL法检测香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合在体内是否可诱导胃癌细胞凋亡。10应用免疫组化检测香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合应用在体内对p-ERK1/2、EGR1、Ki-67、Mcl-1、Bid、caspase-3、DR4、DR5表达水平的影响。结果:1 MTS结果显示,香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合可协同抑制胃癌细胞SGC-7901、MGC-803和BGC-823的增殖(P<0.05),且具有时间和剂量依赖性。2流式细胞术、TUNEL法和Hochest法结果均显示,香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合可协同诱导胃癌细胞SGC-7901和MGC-803细胞凋亡(P<0.05)。3 Western blotting实验结果显示,香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合可诱导胃癌细胞中Mcl-1、总Bid表达水平降低,caspase-3的裂解片段、DR4和DR5升高(P<0.05)。4吖啶橙染色和免疫荧光实验结果显示,香加皮杠柳苷可破坏胃癌细胞的溶酶体膜完整性,并有Cathepsin B、Cathepsin D释放到细胞质。5基因芯片结果显示,香加皮杠柳苷可升高胃癌细胞中EGR1的表达。6 Western blotting实验结果显示,香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合升高胃癌细胞中p-ERK1/2、EGR1的表达水平(P<0.05)。7 MTS法结果显示,香加皮杠柳苷处理胃癌细胞后再敲低EGR1,对胃癌细胞增殖的抑制作用有所下降(P>0.05)。8体内实验结果显示,香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合抑制胃癌移植瘤的生长(P<0.05)。9 TUNEL法结果显示,在裸鼠移植瘤组织中,香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合可诱导胃癌细胞凋亡(P<0.05)。10免疫组化结果显示,香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合可明显升高胃癌细胞EGR1、p-ERK1/2、DR4和DR5表达水平,降低Mcl-1、pro-Bid、pro-caspase-3、Ki-67的表达水平。结论:1香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合应用可通过协同诱导细胞凋亡抑制胃癌细胞的增殖。2香加皮杠柳苷可能是通过溶酶体途径诱导细胞凋亡。3香加皮杠柳苷及其与TRAIL联合可通过上调EGR1及其上游分子p-ERK1/2的表达抑制胃癌细胞的增殖。