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前言 梗阻性黄疸(OJ)可引起全身各系统的病理生理改变，其引起的肝细胞损伤和肝功能衰竭易导致术后并发感染及多系统器官功能衰竭，有较高的死亡率。肝细胞是蛋白合成的主要场所，OJ时肝细胞合成蛋白减少是低蛋白血症的主要原因之一，临床上常以血清白蛋白作为判断肝细胞损害程度及OJ手术的重要愈后指标。因此，保护肝细胞功能对临床围手术期处理有重要意义。 传统的治疗方法均以防止OJ时肝功能损害为主，而且死亡率仍高居不下。通过促进肝细胞再生、保护肝细胞功能将具有广阔的前景。近年重组人生长激素(rhGH)在这方面的作用已引起关注。 rhGH是一种由191个氨基酸组成的单链多肽，能够促进多种细胞增殖，其促进部分肝切除后肝再生作用研究较多，但对OJ受损肝细胞促进再生作用的研究目前国际鲜有报道，国内未见报道。本研究选取增殖细胞核抗原(PCNA)作为细胞增殖程度的指标，旨在通过观察大鼠肝细胞PCNA的表达，探讨rhGH对OJ受损肝细胞再生的影响。 实验材料 实验动物：雄性成年Wistar大鼠，45只，体重300—350克。 实验试剂：北京中山生物技术有限公司PCNA免疫组化试剂瑞士雪兰诺大药厂Saizen重组人生长激素 实验器材：鼠固定手术台、外科手术器械、olympus光学显微镜、日本日立公司7600全自动生化分析仪。 实验方法 将45只大鼠随机分成三组止假手术组KOhF梗阻性黄疽组（OJ人人生长激素干扰组（OJ＋rhGH人每组历只。上腹正中切口进腹，将肝脏向外拉开，暴露肝十二指肠韧带卡O组仅分离肝十二指肠韧带而不结扎胆管，实验组（B＋C组乃0只大鼠分离出胆总管5—0号丝线结扎。术后二周不予进行干扰，等待OJ模型形成。术后三周始 c组双后肢内侧皮下注射 rnGno．v5IU八gk组 B组相同部位注射等量生理盐水 0．75 Im／kg，每日一次，共一周。实验第四周再次麻醉，严格无菌条件下打开腹腔，观察三组大鼠腹腔脏器形态及大体表现，抽取腔静脉血置于试管中测肝功；取部分肝组织用10％福尔马林固定作常规石蜡切片。 肝组织切片HE及PCNA免疫组化染色。光学显微镜下观察各组肝组织形态学改变；光学显微镜下，PCNA免疫组化染色切片肝细胞核呈棕色无论其深浅均视为阳性肝细胞。每张切片随机计数500个肝细胞中 PCNA阳性细胞数。PCNA标记指数一PCNA阳性肝细胞数万00 X 100％。 计量资料采用异方差t检验。 实验结果 OJ及 OJ＋rhGH组一周左右出现全身黄染，尿色深黄。胆总管结扎三周后终止实验，开腹见OJ大鼠肝脏体积增大，表面色暗无光泽，质硬韧。胆总管结扎段以上极度扩张，胆管壁变薄呈囊状卢O组大鼠无上述改变。OJ＋rhGH组改变较 OJ组略轻。抽血测胆红素结果符合OJ。检测肝功结果：白蛋白（ALB）SO组25．QZ ti．484L，OJ组 20．53 t 2．59 g／L，OJ＋rhm组 23．27。1． ·2·98g／L；谷雨转氨酶（ALT＊O组20．07 t 8．98IU／L刀J组174．67 d31．19IU／L，OJ＋rhGH组120．00。ZI．gllU／L。肝组织形态学改变：HE染色SO组肝组织为正常肝脏结构对J组肝细胞局灶性坏死，汇管区、间质及血管周围可见大量炎细胞浸润，纤维组织带增宽，肝脏结构改变明显；而OJ＋rhGH组肝组织较OJ组肝脏结构改变明显减轻，详见附图l－3。PCNA染色SO组肝组织阳性肝细胞较少份组局灶性坏死肝细胞及炎细胞周围可见较多阳性肝细胞；OJ＋rhGH组可见大量阳性肝细胞，并可见体积大、染色深、分叶状或双核等肝细胞核，为再生肝细胞，详见附图4－6。各组PC－NA标记指数（畅）＊O组互．76 t 0．90；OJ组 3．03。0．90；OJ＋hGH组 8．11LI．55。 讨 论 OJ时由于胆汁排出不畅或完全阻塞，胆管内压力逐渐升高，胆汁逆流人血对肝细胞产生毒性作用；胆道梗阻后肠道中胆盐缺失可导致细菌繁殖和肠道粘膜屏障破坏而发生肠道细菌易位问BT厂内毒素血症（ETh入由E’IX诱生的肿瘤坏死因子一。（TN一则通过上调白细胞uMN）和粘附分子表达促使PMN在肝内聚集发挥肝损害作用。本研究结果显示OJ组大鼠肝脏体积增大，表面色暗无光泽，质硬韧。光镜下可见到肝细胞成片坏死，汇管区。间质及血管周围可见大量炎细胞浸润，血管扩张充血，纤维组织带增宽，肝脏结构改变明显。血清 ALB值 OJ组 20．53＊2 59g／L较SO组25．02土1．48 g／L降低P＜o．01，OJ十九＊H组23．27。1．98才L较OJ组20．53。2·59牙L升高P＜0．01，有显著差异；＊LT值四组174．67土3二．191＊／L较＊O组ZO．07。8．981＊／L升高P＜0．of，OJ十 hGH组 120．00土 21．gllU／L较 OJ组 174．67 t 31．191WL降低P＜00二差异显著，有统计学意义。 ·3· 以上结果证明OJ时肝损害严重，rhGH能够减轻肝损害，保护肝功能。 OJ时肝损害的防治措施除手术行胆汁引流外主要通过各种方法抑制肠道细菌过?