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口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)约占所有口腔癌的90％以上,倾向于浸润性生长,易复发和颈部淋巴结转移。其因为可能与口腔组织血管、淋巴管、肌肉丰富,靠近神经纤维等因素有关,但是其分子生物学机制还不太清楚。OSCC的发生发展是多步骤、多基因共同作用的结果。近年来,与OSCC生物学行为相关的多种生物学指标受到关注。实际上,单靠传统的临床及病理因素难以准确判断OSCC的临床生物学行为,而且对于同一部位、同一临床分期的不同患者预后不尽相同的因为目前还不太清楚。因此,找到能够准确反映OSCC生物学行为的预后特征指标十分重要。
研究目的
运用免疫组化方法研究gankyrin、p21WAF1、mdm2蛋白的表达情况,同时根据口腔鳞状细胞癌的临床病理学特点,运用流行病学方法分析其与OSCC临床生物学特点之间的关系。
研究方法
1.回顾性分析2001年1月-2008年5月第二军医大学长征医院口腔科收治的55例OSCC患者的临床、病理资料。分组:根据OSCC发病部位分为唇癌(8例)、舌前癌(15例)、舌根癌(11例)、颊癌(10例)、牙龈癌(11例)5组；根据术前有无淋巴结转移进行1:1配比,有颈部淋巴结转移24例、无颈部淋巴结转移31例(唇癌组无转病例)；对所选病例进行随访,随访时间为术后5～98个月,其中失访6例,有效临床观察病例49例。在预后评价方面,本实验定义有术后局部复发或颈部淋巴结转移为预后差。病例资料分析方法:对发病部位、术前淋巴结转移情况、性别、年龄、肿瘤病理分级、术后局部复发与淋巴结转移情况进行流行病学分析。
2.采用免疫组化EnVisionTM法检测gankyrin、p21WAF1、mdm2在OSCC中的蛋白表达,病理读片,定性分析各基因的表达情况,免疫组化结果采用二级计分法,根据染色强度及阳性细胞的数目进行计分并取平均值(Mean score,MS)定量化处理,分析不同部位OSCC,不同分化程度、术前淋巴结转移与否、不同预后等情况各基因蛋白表达的差异性。统计方法:根据资料方差齐性检验的结果,分别采用完全随机秩和检验(Kruskal Wallis Test)、Wilcoxon检验、Mann-Whitney检验或者单因素方差分析(One-way ANOVA)。
3.对gankyrin、p21WAF1、mdm2三种基因的蛋白表达水平定性、定量数据资料采用Pearson或Spearman法进行基因表达的相关性分析；分析其相关性与OSCC分化、转移、预后等生物学行为指标的关系,研究多基因表达在OSCC中的临床意义。
4.对年龄、性别、发病部位、颈部淋巴结转移情况、肿瘤细胞分化程度等指标进行分类,将预后好组与预后差组进行比较,采用SPSS15.0统计软件进行数据处理,组间差异进行x2检验,分析原发口腔鳞状细胞癌与预后相关的因素。
结果
1.Gankyrin的蛋白表达的阳性率为69.09％,mdm2为85.45％,p21WAF1为60.00％。口腔鳞癌组织中gankyrin、mdm2及p21WA目的表达明显高于癌旁粘膜组织,两者有统计学差异(P<0.05、P<0.05、P<0.05)。
2.Gankyrin蛋白的表达水平与肿瘤的病理分化相关,而与年龄、性别、肿瘤部位、淋巴结转移和预后无明显相关性；mdm2的表达与患者的年龄和肿瘤部位相关,而与性别、病理分化、淋巴结转移和预后无明显相关性；p21waf1的表达与肿瘤的部位相关,而与年龄、性别、病理分化、淋巴结转移和预后无明显相关性。
3.口腔鳞癌组织中gankyrin与mdm2的表达,两者具有明显相关性(r=0.303,P<0.05)；gankyrin与p21waf1的表达,两者具有明显相关性(r=0.311,P<0.05)；mdm2与p21waf1的表达,两者无明显相关性(r=0.297,P>0.05)。
4.四个不同发病部位的口腔鳞状细胞癌中,即唇部、舌部、颊部、牙龈部的预后无显著性差异(P>0.05)；不同性别、年龄组之间的预后无显著性差异(P>0.05)；术前有颈部淋巴结转移组的预后较无颈部淋巴结转移组的预后差(P<0.05)；中低分化组的预后较高分化组的预后差(P<0.05)；当把术前颈部淋巴结转移与病理分级合并考虑时,中低分化合并淋巴结转移组的预后最差(P<0.05)。
结论
我们认为gankyrin在口腔鳞状细胞癌中存在过表达,可能会降低口腔鳞癌分化程度,增强细胞增殖能力；gankyrin、mdm2和p21WAF1之间存在着相互调控的关系并且与口腔鳞癌的发生发展密切相关可作为判断肿瘤增殖程度、浸润转移、估计预后和指导治疗的参考指标。颈部淋巴结转移和中低分化对口腔鳞状细胞癌的预后不利,特别是中低分化OSCC同时伴有淋巴结移者,预后很差,对颈部淋巴结转移或(和)中低分化OSCC患者应加强随访。