【摘 要】
：
去核的哺乳动物细胞（胞质体）已被广泛用于研究细胞核与细胞质在各种细胞过程中的不同作用，如细胞核对细胞迁移能力的影响、细胞核与线粒体等细胞器之间的关系、以及细胞质遗传等。在本次实验中，我们报道了一种改进的有效去除哺乳动物细胞核的方法，即将细胞接种在细胞外基质（ECM）包被的24孔皿，并在细胞松弛素B和秋水仙素存在的情况下于6000rpm/min和35℃离心60min。BMSC和BHK21细胞达到95%以上的去核效率。另外，我们也检测了细胞膜流动性对去核效率的影响，我们的实验结果表明，增加细胞膜的流动性能够显
论文部分内容阅读
去核的哺乳动物细胞（胞质体）已被广泛用于研究细胞核与细胞质在各种细胞过程中的不同作用，如细胞核对细胞迁移能力的影响、细胞核与线粒体等细胞器之间的关系、以及细胞质遗传等。在本次实验中，我们报道了一种改进的有效去除哺乳动物细胞核的方法，即将细胞接种在细胞外基质（ECM）包被的24孔皿，并在细胞松弛素B和秋水仙素存在的情况下于6000rpm/min和35℃离心60min。BMSC和BHK21细胞达到95%以上的去核效率。另外，我们也检测了细胞膜流动性对去核效率的影响，我们的实验结果表明，增加细胞膜的流动性能够显著改善去核效率，反之则导致去核效率下降。将细胞接种在有ECM包被的玻璃底24孔皿中离心并去核，细胞骨架和细胞器等可利用共聚焦显微技术直接检测。有研究报道通过密度梯度离心的方法去核导致核膜破裂。我们发现降低离心条件可以阻止核膜破裂。接着，为抑制残留的有核细胞的增殖，我们在培养液中添加紫杉醇或阿霉素，有核细胞的增殖可被完全阻断。然而，令我们惊讶的是，紫杉醇显著促进了胞质体的存活率。通过膜联蛋白AnnexinV-FITC和碘化丙锭染色分析，结果表明胞质体主要通过凋亡方式死亡，ECM能在一定程度上抑制胞质体的凋亡，紫杉醇的存在进一步抑制了胞质体的凋亡。利用Mito-Tracker进行线粒体染色分析，显示紫杉醇处理使胞质体线粒体呈细长网络状，表明线粒体融合与分裂过程受到抑制。此外，线粒体膜电位检测结果表明紫杉醇能增加胞质体线粒体膜电位，这些结果提示紫杉醇可能是通过扰动线粒体功能从而延长胞质体的存活时间。总之，在本实验中我们建立了一种有效且快速的哺乳动物细胞去核方法，这可以促进对细胞核和细胞质相互作用的研究。
其他文献
伊戈达拉在季后赛第一场仅仅拿到了4分，但是他还是给了球队另一种支持，送出了8个篮板和9次助攻，在整场比赛中，有伤在身的伊戈达拉将大多数出手机会让给了队友，自己仅仅出手7次。即便如此他们还是功亏一篑，在曾经领先的时候被反超，在追平的时候因为进攻乏力而受挫。当然这几乎也是整个76人和伊戈达拉赛季的缩影，在季后赛第一场之前，伊戈达拉还希望自己能够带伤作战鼓励球队，“我虽然不是100％状态，但我肯定没问题
自去年夏天波什离开多伦多奔赴迈阿密之后，猛龙就不再吸引人们的关注，战绩惨淡早在意料之中，但是这支球队经过一个赛季的磨练终于重新找到了球队的核心球员：巴尼亚尼和德罗赞。 龙龙虫 失望猛龙的赛季总结 巴尼亚尼本赛季在进攻端和防守端都有了长足的进步。多伦多终于有了一个能防守大个子的中锋，他看起来更利于对付小一号的内线队员，这便是用整个赛季的学费换来的代价。核心的确定标志着这支年轻的球队彻底
2009年是我第一次面对面见到了保罗，当时印象最深刻的是：他是一个有着超级感染力的邻家大男孩，但是很危险，特别是在场上的时候。他在比赛中轻易就过掉了四名球员组成的人墙式的防守，而在各种采访和活动中，保罗又比一般NBA球员表现得要敬业。他甚至对于任何一种示范都亲力亲为。保罗的侵略性和亲和力完美地融合是我对他最直观的印象。 在确定进入季后赛之后，黄蜂队全队对于时隔一年进入季后赛的现实并没有多少欣喜若
对虾养殖是世界水产养殖的重要组成部分，然而近年来病原性疾病不断威胁着对虾养殖业的健康发展。为了制定有效的防治策略，人们开始更加关注对虾先天免疫防御的分子机制。虽然已有诸多研究报道对虾体内存在多种能响应病原胁迫的应激蛋白，但与鱼类等高等水产养殖动物相比，还大为落后。因此，有必要采取新的策略，对对虾如何响应病原刺激进行深入研究和探索。为此，本研究在优化对虾血浆低丰度蛋白纯化技术的基础上，采用分子生物学、蛋白质组学和免疫学等策略，对白斑综合症病毒（whitespotsyndromevirus，WSSV）刺激后的
血蓝蛋白（Hemocyanin,HMC）是近年来在对虾中新发现的一种多功能免疫因子，其不仅具有酚氧化酶、抗病毒、抑菌、凝集等多种免疫学活性，而且还可参与多条信号通路的调控。MAPK（Mitogen-activatedproteinkinase）信号通路是在高、低等生物中普遍存在的一条重要信号通路，其可介导细胞生长、分化和凋亡等多种生物学过程。有趣的是，本课题组前期采用RNA干扰（RNAi）和组学分析等方法，初步发现凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）血蓝蛋白有可能参与MAPK通路的调控。为
对虾养殖业是我国沿海水产养殖业的支柱产业，而病害问题是制约该产业发展的主要瓶颈之一。目前，学者们认为加强对虾基础性研究，揭示对虾自身免疫防御机制是破解上述问题的关键环节之一。近年来研究发现，存在于对虾血淋巴中的血蓝蛋白（Hemocyanin，HMC）是一种多功能的免疫分子，其除了参与携氧外，还具有酚氧化酶、抗病毒、抑菌和凝集等多种免疫学功能。有趣的是，本课题组最新研究发现，凡纳滨对虾蛋白激酶CK2α（Litopenaeusvannameicaseinkinase2α,LvCK2α）可能介导血蓝蛋白的丝氨酸
有害藻华(Harmfulalgalblooms,HABs)是由浮游植物在水体中爆发引起的对人类社会与经济有害生态现象。随着近年来有害藻华频发，通过生物方法治理赤潮渐渐成为一种有效且洁净的方法。本论文围绕一株具有杀藻活性的藻际微生物Hahellasp.KA22，利用生物信息学的方法对其遗传结构及表达调控展开研究；并通过比较基因组学研究杀藻物质产生的机制，取得的主要研究成果如下：
1）本论文首先对海洋杀藻菌Hahellasp.KA22的表观性状及杀藻活性展开研究。通过对杀藻物质的提取分离纯化，并利用
抗生素的发现和使用挽救了众多的生命，是人类在医学发展中的重大里程碑。然而，随着抗生素的使用，也出现了严重的病原菌耐药性问题。随着病原菌的耐药性越来越强，在治疗病原菌感染时所需要的抗生素剂量也越来越大，甚至原本低剂量就效果明显的抗生素也会失效，导致越来越多的人死于病原菌感染。病原菌耐药性的增强就需要更大量的抗生素，又会增强细菌耐药性，不利于人和动物的健康发展。
水生生态系统被认为是抗生素抗性基因（antibioticresistancegenes,ARGs）的储存库，目前对一些内陆河流，尤其是受人
不经意间，又一个赛季结束了。看着墙上的赛程表，每个球迷心里或许都会有不同的感触。从对新赛季的憧憬到对全明星赛的期待再到对季后赛席位的猜测，终于82场常规赛尘埃落定，有些球队继续厮杀，有些球队各自散去。回首这个赛季，许多事件都掀起了无数的波澜，让人们无法忘怀。 不经意间，又一个赛季结束了。看着墙上的赛程表，每个球迷心里或许都会有不同的感触。从对新赛季的憧憬到对全明星赛的期待再到对季后赛席位的猜测，
南瓜多糖是从南瓜中提取分离出来的一类具有降血糖、抗氧化、抗肿瘤以及抑菌活性等功能的重要天然生物活性物质。目前对南瓜多糖的研究主要是多种组分整体多糖的活性研究，对各组分的结构、活性并未深入探讨。在降血糖方面，已有报道显示南瓜多糖对胰岛β细胞具有一定的保护作用，但对其具体的保护机制尚未明晰。因此本文通过建立体外细胞模型，对其可能的保护机制进行初步探讨。本文主要研究内容如下：
（1）南瓜多糖的提取与分离纯化
本文结合微波和超声辅助提取技术的优点，探讨超声微波辅助萃取仪提取南瓜多糖的最佳工艺条