【摘 要】
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本研究对槟榔基因组DNA的提取方法进行了改良,优化了槟榔RAPD反应体系,建立了最佳RAPD扩增体系,对收集的海南槟榔种质资源进行了遗传多样性分析,以图揭示海南槟榔遗传多样性
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本研究对槟榔基因组DNA的提取方法进行了改良,优化了槟榔RAPD反应体系,建立了最佳RAPD扩增体系,对收集的海南槟榔种质资源进行了遗传多样性分析,以图揭示海南槟榔遗传多样性与槟榔黄化病的发生传播关系。研究结果如下:1.建立了槟榔RAPD反应分析体系。25μL RAPD反应体系内含1×PCR缓冲液,1μmol/L引物,2.0mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTPs, 1UTaqDNA聚合酶,50ng模板DNA。RAPD扩增程序为:94℃预变性240s,94℃变性45s,34℃退火60s,72℃延伸90s,循环40次,72℃充分延伸10 min。2.从80条RAPD引物中筛选出10条引物对样品进行了RAPD分析。共扩增出101条条带,扩增出的片段一般在600bp-3000bp之间;其中多态性条带为78条,槟榔间的多态性为77%。3.对海南20个槟榔主要种植县市的样品74份样品进行聚类分析结果表明,同一地区采集的槟榔样品间的相似系数集中在0.93左右,说明海南槟榔个体之间的基因型是不一致的,具有一定的多态性的,无纯合的群体存在;同一地区的槟榔个体间的亲缘关系都较近,但是个体间的遗传多样性比较丰富;不同地区的槟榔相似系数在0.93以下,个体差异明显。4.对海南、云南、印度、柬埔寨槟榔样品和三药槟榔样品进行聚类分析结果表明,三药槟榔与槟榔相似系数为0.38,说明三药槟榔与槟榔间的亲缘关系较远;在相似系数为0.78左右槟榔群体被分为两类,第一类中包括云南Ⅰ与海南Ⅰ、印度、柬埔寨样品,其中云南Ⅰ与海南Ⅰ亲缘关系较近,印度、柬埔寨样品亲缘关系较近;第二类包括云南Ⅱ、海南Ⅱ样品,其相似系数为0.8左右。5.对海南病区与非病区群体聚类分析结果表明,在相似系数为0.79时槟榔可以分为两大类。两种类型均有非病区样品分布,但是两种类型中的槟榔群体,在发病时间和发病程度上存在一定的差异。第一类型槟榔群体发病较重、较早;第二类型中非病区槟榔群体较多。
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