保幼激素(Juvenile hormone,JH)可调控昆虫成虫繁殖,缺失JH会导致虫体生殖滞育,表明JH可能在昆虫生殖发育和成虫滞育中发挥着重要作用。目前JH在昆虫生殖发育和成虫滞育中的作用机理尚不明确。大猿叶虫Colaphellus bowringi Baly是一种兼性滞育的蔬菜害虫。在25℃下,长光照条件下诱导为注定滞育个体,短光照条件下诱导为注定非滞育个体,成虫羽化到进入滞育状态的4天取食期为滞育准备期。注定滞育个体在滞育准备期内卵巢未发育且无卵黄沉积,脂肪体发育良好,后期填充整个腹部;注定非滞育个体卵巢发育良好,卵黄发生沉积,脂肪体稀疏。本研究以大猿叶虫为实验对象,采用RNAi技术探究保幼激素耐受蛋白(Methoprene-tolerent,Met)在大猿叶虫生殖和滞育中的功能。主要结果如下:1.JH对大猿叶虫卵巢发育和脂质累积的影响对大猿叶虫注定滞育个体注射15μg保幼激素类似物Methoprene后,虫体卵巢发育,发育程度与注定非滞育个体相似。相比对照组,Methoprene处理组Vg的表达水平上调,脂肪体内脂滴信号减弱,相对脂质含量降低。2.Met基因的克隆和与序列分析通过从大猿叶虫转录组数据库中获得Met的序列信息,根据序列设计引物,经克隆、测序以及拼接,获得Met1、Met2基因的全长序列,cDNA全长分别为2045 bp、2044 bp。通过Expasy转录软件进行蛋白的功能结构域分析发现两种Met仅N端20个氨基酸存在差异,推测两种Met基因功能可能类似。通过Met的系统发育进化树发现两种Met同属一分支,且与赤拟谷盗Met亲缘性最高。3.Met在大猿叶虫生殖和滞育中的功能采用RNAi技术对大猿叶虫注定滞育个体干扰Met后外源施加Methoprene,Vg1和Vg2的相对表达均显著低于对照组。干扰大猿叶虫注定非滞育个体Met后,虫体卵巢发育受抑制,类似于滞育虫体的发育状态;脂肪体内脂滴信号减弱,相对脂质含量上升;相比对照组,脂肪体内Fas、Hsp23、Hsp27的表达水平显著上调,但Foxo、Hsp21的表达水平与对照组无显著差异。本研究结果表明,JH通过Met诱导卵巢发育和Vg转录促进生殖、抑制虫体脂肪体的累积和虫体抗逆性,从而抑制滞育的发生。研究结果为JH信号途径机制的进一步解析提供线索与依据。