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目的:利用PARP-1和p53基因双缺失的小鼠髓母细胞瘤细胞系,探讨DNA损伤修复因子Brca1、Nbs1、Ku70、Ku80和Rad51对小鼠髓母细胞瘤发生的意义及其相互作用关系。方法:对PARP-1和p53基因双缺失的髓母细胞瘤细胞进行原代培养,利用免疫荧光技术鉴定神经细胞标志物在髓母细胞瘤细胞系中的表达。采用基因转染技术用阳离子脂质体介导将PARP-1质粒转染到小鼠髓母细胞瘤的细胞系与正常对照细胞系中,经过有限稀释法选择荧光较强的细胞并不断筛选及克隆化培养,建立稳定表达PARP-1荧光蛋白的细胞系。利用Western blot技术检测髓母细胞瘤细胞系中PARP-1的表达,并观察计算细胞增殖情况和染色体数目。然后用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后肿瘤细胞系和正常细胞系中Brca1、Nbs1、Ku80和Rad51的蛋白或RNA在不同细胞周期的表达,以分析PARP-1对各因子的作用。结果:所建立的小鼠髓母细胞瘤细胞系,呈多角形、短梭形,免疫荧光分析可见未成熟神经元标志性蛋白Vimentin、Dcx、β_Ⅲ-Tubulin等表达阳性,证明该肿瘤细胞的神经源性;稳定表达PARP-1荧光蛋白的细胞Western blot检测PARP-1蛋白阳性;对细胞系进行染色体核型分析表明其细胞染色体数为非整倍体;在不同细胞周期中检测到DNA双链断裂损伤修复途径中的同源重组(HR)修复途径中的Rad51在细胞周期S期和G2/M期表达量增高,而非同源末端连接(NHEJ)修复途径中的Ku70、Ku80未发生明显变化,DNA损伤修复的早期基因Nbs1也没有明显变化;Brca1基因在稳定表达PARP-1和PARP-1缺失的髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)细胞系的细胞周期的S期和G2/M期表达增高,且在后者中Brca1表达量更高。结论:成功建立了PARP-1和p53双缺失的小脑神经源性髓母细胞瘤细胞系和稳定表达PARP-1荧光蛋白的髓母细胞瘤细胞系;在PARP-1缺失的髓母细胞瘤细胞系中,DNA双链断裂损伤修复HR途径中的修复因子Rad51在DNA损伤发生时高表达,其蛋白水平受PARP-1影响,而DNA损伤早期识别因子Nbs1和NHEJ途径的修复因子Ku70和Ku80的蛋白水平在细胞周期中保持不变。HR途径的Brca1的转录水平在DNA合成期增高,PARP-1可以抑制Brca1的转录水平。