miRNA-221/222表达与胶质瘤放射敏感性的相关性研究

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目的:观察人胶质瘤组织及胶质瘤细胞系中miRNA-221、miRNA-222的表达变化,探讨其与肿瘤放射敏感性的相关性。方法:体外培养的人胶质瘤细胞系U87、U251、A172、LN229;收集天津市环湖医院神经外科胶质瘤手术标本60例,均经病理证实,按照Trizol试剂盒说明书提取其总RNA,采用RT-PCR法测定miRNA-221及miRNA-222,以正常脑组织为对照。60例胶质瘤患者术后均予以放疗,治疗后MRI检查随访,分析胶质瘤患者的放疗疗效。采用克隆形成实验测算X线照射后(照射剂量为2Gy)的胶质瘤细胞存活率(SF),以胃黏膜上皮细胞(ges)为对照,验证各组胶质瘤细胞系放射敏感性。结果:1、miRNA-221和miRNA-222在胶质瘤组织中表达上调:与对照组织比较,胶质瘤组织中miRNA-221、miRNA-222均呈高表达(P<0.05),其中高度恶性胶质瘤组织中miRNA-221、miRNA-222表达量均明显高于低度恶性者(P<0.05)。在WHOIII和WHOIV胶质瘤中表达量较WHO II或WHO I明显增高(P<0.05)。miR-221和miR-222的表达与胶质瘤的病理分级(WHO分级)明显相关(P<0.05)2、miRNA-221和miRNA-222在胶质瘤细胞中表达上调:实时荧光定量PCR证实:与正常的胃黏膜上皮细胞比较,niR-221、miR-222在U87,U251,A172,Ln229胶质瘤细胞系中均高表达,且在四种胶质瘤细胞中,miR-221、miR-222在U87细胞中表达最高,U251,A172, Ln229细胞中表达依次降低。我们随后通过X线照射后胶质瘤细胞存活率(SF),以U87细胞系的SF最大,其放射抗性也就越大,而U251,A172, Ln229细胞系SF依次降低,放射抗性也依次降低。miRNA-221、 miRNA-222表达量与胶质瘤SF呈正相关关系(r=0.673,P<0.05).3、低、高度恶性患者术后放疗效果及生存时间比较部分切除的同级别胶质瘤患者中,MiR-221、miR-222(?)表达患者放射治疗后肿瘤组织平均缩小约92.5%,而miR-221、miR-222高表达患者放疗后的肿瘤组织平均缩小程度只有48.6%。在低级别胶质瘤中,在患者的其它预后因素相似的前提下,miRNA-221和miRNA-222表达低,患者中位生存期为49.3±1.6月;而miRNA-221和miRNA-222表达高的患者中位生存期为23.8±0.7月。患者miRNA-221和miRNA-222表达与患者的生存时间经相关性分析得出r=-0.87,P<0.05。同样,在高级别胶质瘤患者中,miRNA-221和miRNA-222表达低,患者中位生存期为22.3±0.9月;而miRNA-221和miRNA-222表达高的患者中位生存期为12.3±0.5月。患者miRNA-221和miRNA-222表达与患者的生存时间经相关性分析得出r=-0.63,P<0.05.胶质瘤患者miRNA-221和miRNA-222的表达与患者的生存时间呈负相关。结论:1、miR-221和miR-222在胶质瘤组织中均高表达,且随胶质瘤级别的增高而表达量增多。miR-221和miR-222表达与胶质瘤恶性程度呈正相关关系(P<0.05)。2. miR-221、miR-222在在四种胶质瘤细胞系中均高表达,miRNA-221、 miRNA-222表达量与胶质瘤细胞SF呈正相关关系。即随着胶质瘤细胞niR-221、miR-222表达量的增加,其放射敏感性降低。3、胶质瘤组织的放射敏感性随miRNA-221和miRNA-222表达上调而降低。miRNA-221和miRNA-222表达与患者肿瘤的放射敏感性及生存时间呈负相关关系。
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