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乙型脑炎病毒(Japancse encephlitic virus,JEV)和西尼罗病毒(West Nile Virus, WNV)同属于虫媒病毒黄病毒科,黄病毒属、乙型脑炎病毒抗原复合组(Japanese Encephalitis Virus Serocomplex Group)的成员。该复合组成员病毒属于蚊媒病毒,主要由鸟类携带,经蚊虫传播给人,也可以感染其它哺乳动物,引起多种临床症状,包括发热,甚至脑炎及脑膜炎,重者可致死。近年来,该组成员中的西尼罗病毒流行已经给人类的健康造成严重的损害和威胁。国外将西尼罗热归于新发传染病(emerging infectious disease)范畴,我国国家卫生部将西尼罗热归于可能传入的新发传染病。早期发现和预防WNV的传播是控制西尼罗热爆发流行的主要措施,检测蚊虫体内的WNV感染率是西尼罗病毒传播预警的一个直观指标。从人员和设备需求来看,快速免疫检测方法具有明显的优势。 黄病毒是正链RNA病毒。以西尼罗病毒为例,它由10962个核苷酸组成,其开放读码框编码病毒3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中包膜蛋白(E)和膜蛋白(M)是病毒主要的结构蛋白,可能与病毒的毒力及侵袭性有关,也是病毒的主要抗原。但是,由于黄病毒属成员间在病毒表面尤其是E蛋白上存在许多共同的抗原表位,所以在血清学检测时容易出现交叉反应,使反应结果特异性不高。文献报道,针对登革病毒M蛋白的前体prM蛋白的单克隆抗体与乙脑病毒抗血清无交叉反应,提示在prM蛋白上可能存在病毒特异性抗原表位。为了探索高效、灵敏的检测WNV方法,本研究分别克隆了JEV和WNVprM基因,并原核表达,制备分别针对JEV和WNVprM蛋白的特异性单克隆抗体,用于JEV复合组成员感染的鉴定、鉴别诊断和流行病学研究。 首先,本研究采用JEV疫苗株免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,经过五次亚克隆筛选,获得分泌针对JEV疫苗株的单抗的杂交瘤细胞株V6B9,抗体亚型为IgG1,抗体滴度为10~5。ELISA、Western Blot和免疫组化检测结果证实该株单抗能够与JEV感染鼠脑上清中的病毒,以及与WNV反应。该抗体可用于JEV复合组病