美藤果壳提取物降血压功效评价及干预高血压大鼠肠道菌群的研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yjyu2012
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美藤果壳是美藤果产业加工过程中的产生的废料,随着美藤果种植产业的发展,美藤果果壳的降压功效被人们发现,但相关研究一直处于空白状态。本研究以云南普洱地区种植的美藤果的果壳为原料,在测定美藤果壳基本成分的基础上,制备具有降压功效的果壳提取物,并对其安全性进行初步评价。随后以自发性高血压大鼠为模型,对其短期干预降血压效果、长期干预降低血压效果以及降低高血压靶器官病理损伤等进行了评价。此外,还对其影响高血压大鼠肠道菌群的情况进行深入研究,探讨美藤果壳可能的降压机理;并采用物质分离纯化和结构鉴别手段,获得了美藤果壳降压的有效部位。研究得到的主要结果和结论如下:(1)采用的美藤果壳为原料水分含量为18.4%,其中的主要成分包括糖类9.50±0.50%、蛋白质1.82±0.05%、灰分7.84±0.35%,活性物质主要有多糖4.36±0.37%、多酚0.93±0.02%、皂苷1.01±0.07%和极少量黄酮、有机酸等物质;(2)美藤果壳提取物(SIS)小鼠急性毒理学试验评价结果显示:小鼠对试验物的最大耐受剂量不低于12 g/kg,观察期内实验组小鼠的体重增长与空白对照组无差异,主要脏器未发现明显异常,依据毒物分级依据判断SIS为食品级无毒;(3)降压效果评价:通过血管紧张素(ACE)体外抑制实验证明,美藤果壳提取物在40 mg/mL的浓度下有较好的抑制效果。据此设计动物学实验,结果发现,在粗提物高剂量组(400 mg/kg·BW),美藤果壳提取物干预组呈现显著降压效果,用药0.5h至6.0 h内高血压大鼠血压水平明显下降(P<0.05);采用美藤果壳提取物长期灌胃高血压大鼠,干预组大鼠在第33天时血压低于SHR模型组,在第45天出现显著差异(P<0.05),且具有持续性。体内体外实验证明:美藤果壳提取物(SIS)具有长期降血压效果;(4)对高血压大鼠连续灌胃美藤果壳提取物51天后,取大鼠结肠内容物进行16S rDNA测序,结果发现:美藤果壳提取物可以显著提高SHR大鼠肠道微生物群落多样性,同时,增加Akkermansia(艾克曼菌,Akk菌)、Lactobacillales(乳酸杆菌)等益生菌的丰度,而降低Parabacteroides、Prevotella(普雷沃菌属)和Bacteroides(拟杆菌属)等可能引起血压升高和肠道疾病的有害菌的丰度。主成分分析(PCA分析)和MRPP群落结构差异显著性检验结果显示菌群结构呈现明显差异。组间物种差异T-test检验结果显示,两组在门和属水平均出现大量差异物种。表明美藤果壳提取物具有调节、改善高血压大鼠肠道微生物群落结构的作用。对WKY大鼠进行长期高盐饮食和美藤果壳提取物干预后测定其肠道菌群,结果发现:高盐饮食和美藤果壳提取物干预均能引起大鼠肠道微生物群落多样性、结构和物种显著差异。高盐饮食下,Bilophila(嗜胆菌属)等易引起肠道炎症的致病菌丰度升高,而对正常饮食和高盐饮食的大鼠增加美藤果壳提取物干预可以抑制WKY大鼠Prevotella(普雷沃菌属)等致病菌,协助改善WKY大鼠肠道菌群健康。(5)美藤果壳经粗提取、萃取、硅胶柱层析分离纯化后,确定降压有效部位为美藤果壳水提取物的正丁醇萃取物,经硅胶柱层析氯仿/甲醇(7:3)的部位,经过核磁共振和质谱初步鉴定:主要成分为皂苷类物质。
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