论文部分内容阅读
背景微小RNA (MicroRNA, miRNA)是由21-23个核苷酸组成的内源性小的非编码RNA,通过抑制基因翻译或使RNA转录子裂解来调控蛋白的表达。越来越多的研究表明miRNA在多种人体肿瘤中异常表达,并且在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着至关重要的作用。与其他头颈部鳞状细胞癌相比,下咽鳞癌的预后较差,5年生存率约为25%一40%,预后较差的原因有就诊时已达晚期、局部复发及远处转移。尽管手术治疗、放化疗等治疗手段已取得进展,下咽鳞癌患者的生存率并无明显提高。因此,充分了解下咽鳞癌的分子致癌机制对提高疾病的诊断、治疗和预后都有重要意义。目的1、检测miR-214在晚期下咽鳞状细胞癌中的表达。2、探讨miR-214对FaDu细胞侵袭迁移能力及增值克隆的影响。3、初步探讨miR-214影响FaDu细胞侵袭迁移能力的作用机制。方法利用qRT-PCR技术检测30例晚期下咽鳞癌患者肿瘤组织及正常粘膜组织中miR-214的表达；通过转染过表达载体hsa-mir-214上调FaDu细胞中miR-214的表达；采用Transwell侵袭、迁移实验和平板克隆实验,分别检测miR-214表达上调后对FaDu细胞侵袭、迁移及克隆形成能力的影响；利用Western blot检测上调miR-214表达对TWIST蛋白表达的影响；运用双荧光素酶实验检测TWIST是否为miR-214的直接作用靶基因。结果1、miR-214在晚期下咽鳞癌组织中的表达(0.311±0.206)明显低于下咽正常粘膜组织中的表达(1.620±1.394),差异有统计学意义(t=5.09,P<0.05)。2、实验组FaDu细胞转染hsa-mir-214后,miR-214的表达较阴性对照组明显上调(t=6.347,P<0.05)。3、Transwell迁移和侵袭实验显示,实验组FaDu细胞迁移能力及侵袭能力均明显低于对照组(t=11.6,P<0.01；t=6.499,P<0.05)。4、平板克隆实验显示,实验组与对照组相比,平均克隆形成数及克隆形成率均无明显差异(t=0.592,P>0.05),miR-214对FaDu细胞增殖能力无明显影响。5、Western blot结果显示,miR-214上调后的实验组细胞Twist蛋白的表达明显低于对照组细胞中的表达(t=6.545,P<0.05)。6、双荧光素酶实验结果显示,实验组与对照组相比,萤火虫荧光的相对表达量无明显降低,证明TWIST不是miR-214的直接作用靶基因。结论1、miR-214在晚期下咽鳞癌组织中低表达。2、miR-214可明显抑制FaDu细胞的侵袭、迁移能力,其作用机制与抑制TWIST蛋白表达有关,但TWIST不是miR-214的直接作用靶基因。3、miR-214对FaDu细胞增殖能力无明显影响。