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目的:
以三种心肌缺血大鼠模型为研究对象,观察抗心绞痛方(KXJTF,下同)的药效,并借助实时荧光定量PCR(Realtime PCR)、免疫组化等技术,研究心肌缺血时血脂、内皮功能与心肌微血管功能之间的关系,探讨KXJTF防治心绞痛的可能机制。
方法:
本研究采用三个大鼠心肌缺血模型:皮下注射异丙肾上腺素(ISO)模型,冠状动脉结扎模型,高血脂&冠脉结扎模型,进行药效学实验,并进一步研究其可能的作用机制。以POWERLAB生物信息采集分析系统和CHART5.0软件,测量心肌缺血大鼠的心电图II导联ST段变化值;颈总动脉逆行插管测量左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张术期压(LVEDP)、左室内压上升段最大变化速率(+dp/dtmax)和左室内压下降段最大变化速率(-dp/dtmax)等:检测血清肌钙蛋白(TnI)和肌酸激酶(CK),肌酸激酶同工酶(CK-MB),乳酸脱氢酶(LDH),谷草转氨酶(AST)浓度。
以放射免疫、酶联免疫(ELASA)、化学比色法等方法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),内皮素(ET)和一氧化氮(NO)含量,以及血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)浓度。
以免疫组化法和ELASA法测定心肌组织中I型内皮素转换酶(ECE-1)和内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的水平;以Real-time PCR检测心肌组织ECE-1mRNA和eNOS mRNA的表达;以免疫组化的方法标记心肌微血管,并以病理图文分析软件观察心肌微血管密度(MVD)的改变。
结果:
结果显示:KXJTF可促进LVSP、LVEDP等血流动力学指标的恢复,可降低外周血CK-MB,CK等心肌酶水平,降低Tn1水平,并可促进心电图的恢复,可调节高血脂大鼠的血脂水平,升高心肌组织SOD和NO水平,降低ET和MDA水平,调节心肌组织中eNOS和ECE-1及eNOS mRNA和ECE-1 mRNA的表达,提高心肌MVD。
结论:
KXJTF可改善多种大鼠心肌缺血模型的血流动力学、心肌酶、血脂、心电图等指标,并可调节NO、ET及其eNOS和ECE-1水平和mRNA表达。其机制可能是通过降低血脂,减缓了对内皮功能的损伤,从而改善微血管功能,起到防治心绞痛发作的效果。本研究为冠心病心绞痛的的机制提供了研究思路,为治疗冠心病心绞痛的中药复方新药的开发奠定了初步实验基础。