【摘 要】
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纤维素酶Cel5A与Cel6A缺乏是限制纤维素酶制剂高效酶解纤维素的关键因素。本文尝试构建高效表达里氏木霉Cel5A与Cel6A的毕赤酵母重组菌株以弥补目前Cel5A与Cel6A天然分泌不足,通过基因密码子偏好性优化、GC含量调整与mRNA二级结构预测等手段优化里氏木霉Cel5A与Cel6A基因,构建表达载体pPIC9K-eg2与pPIC9Kcbh2,将其分别电转化导入毕赤酵母GS115以构建诱导
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纤维素酶Cel5A与Cel6A缺乏是限制纤维素酶制剂高效酶解纤维素的关键因素。本文尝试构建高效表达里氏木霉Cel5A与Cel6A的毕赤酵母重组菌株以弥补目前Cel5A与Cel6A天然分泌不足,通过基因密码子偏好性优化、GC含量调整与mRNA二级结构预测等手段优化里氏木霉Cel5A与Cel6A基因,构建表达载体pPIC9K-eg2与pPIC9Kcbh2,将其分别电转化导入毕赤酵母GS115以构建诱导型毕赤酵母重组子;同时构建表达载体pGAPZαA-eg2与pGAPZαA-cbh2,分别电转入毕赤酵母X
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海藻糖是一种安全、可靠的非还原性二糖,广泛存在于自然界中。海藻糖性质稳定,对生物体或生物大分子具有优良的抗逆保护作用,这些独特的生物功能和理化性质,使其在医药、食品、农业等多种行业应用前景广阔。麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltooligosyl trehalose synthase,MTSase,EC5.4.99.15)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltooligosyl trehalose tr
角蛋白酶是一种能够降解角蛋白的特殊酶类,在饲料、化妆品、制革和环境保护等方面都有广泛的应用前景。目前,由于菌株角蛋白酶表达量不高或致病性等因素,较少用于角蛋白酶的商业化生产。本课题在前期工作中筛选获得一株嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia BBE11-1),本研究根据毕赤酵母表达系统的优点,成功构建了高效表达角蛋白酶的重组毕赤酵母P.pastoris SMD
热带假丝酵母(Candida tropicalis)是一种重要的长链二元酸工业生产菌株,本论文以一株尿嘧啶营养缺陷型菌株C.tropicalis XZX为研究对象,以烷烃代谢过程中的β-氧化途径中的关键基因为目标,通过分子生物学技术删除细胞内的肉毒碱乙酰基转移酶基因(CAT)和(或)酰基辅酶A氧化酶基因(POX4和POX5),并对不同的基因缺失突变株进行了功能鉴定。此外,论文还利用绿色荧光蛋白(g
乙偶姻作为重要的平台化合物,广泛应用于医药、食品等行业;其还原产物2,3-丁二醇也是一种重要的化工原料和液体燃料,广泛应用于化工、航空航天等领域。近年来利用微生物发酵法合成乙偶姻和2,3-丁二醇受到越来越多的关注,本研究以符合食品安全要求的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA5-5)为研究对象,对其进行代谢工程改造分别合成乙偶姻和2,3-丁二醇,主要研究内容如下:
脯氨酸氨肽酶是一种可特异地从多肽和蛋白质N端水解脯氨酸残基的外肽酶,其与内切蛋白酶复配使用可以增加蛋白质的水解度,在蛋白类食品水解加工产物苦味的去除,特别适合应用于脯氨酸含量较高的蛋白原料水解。选择食品安全菌株Bacillus subtilis对脯氨酸氨肽酶进行外源表达可以大幅度提高其表达水平,降低工业化生产的成本。本研究以连接有脯氨酸氨肽酶cDNA序列的质粒pMD19-pap为模板,设计引物扩增
血栓是导致中老年人心肌梗塞、中风等心脑血管疾病的主要原因之一,血栓疾病已经严重威胁到人类的健康。因此寻找和开发安全可靠、无副作用的溶栓药物具有重要意义。纳豆激酶(Nattokinase,NK,EC 3.4.21.62)因其特有的强溶栓作用被认为是最有潜力的新型溶栓试剂。但产酶量低严重影响了纳豆激酶的生产和应用,因此本文重点研究如何提高纳豆激酶表达量。本论文首先研究了六种不同启动子对纳豆激酶在枯草芽
本论文以一株高产丙酮酸的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)TAM为研究对象,运用代谢工程策略,从构建L-苹果酸的胞质还原路径(rTCA路径)、增强L-苹果酸的外转运、解除C4-二羧酸转运蛋白的泛素化修饰、优化代谢路径的平衡等四个方面调控碳代谢流,从而实现L-苹果酸的高效生产。主要研究结果如下:1.研究了Afpyc、Afmdh、Ropyc和Romdh基因组合表达对酿酒酵母积
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丁醇作为一种新型生物能源,具有能量密度高、腐蚀性低等优点。化石能源危机引起生物质能源的研究热潮,利用微生物发酵的方法来制备丁醇较化学合成法而言,具有环保且操作简便等优点。木质纤维素是最为丰富而廉价的生物质资源,但是不能被产丁醇菌株直接利用;利用酸或碱水解木质纤维素虽然能够产生可被微生物利用的糖类,但同时会产生抑制微生物生长的化学物质,这限制了木质纤维素水解液在丁醇发酵中的应用。本文以筛选获得的丙酮