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细胞间连接是多细胞有机体中相邻细胞之间通过细胞质膜相互联系以及发挥协同作用的重要基础,在人类和动物体内主要存在四种形式,紧密连接是其中较为重要的一种。紧密连接是细胞/细胞间连接复合物的最顶端的组成成分,是液体和溶质通过细胞间隙的主要屏障,并在调节细胞增殖、分化和凋亡之间的平衡方面发挥关键作用,它主要由claudins(CLDNs)、闭合蛋白(occludin)、连接粘附分子(JAMs)等膜蛋白及紧密黏连蛋白(ZO-1、ZO-2和Z0-3)等胞浆蛋白组成,其中CLDNs是紧密连接最主要的成分,主要决定紧密连接的结构和功能。在肿瘤中CLDNs的表达经常发生改变,例如,CLDN1在食管癌中表达下调,CLDN 7在胰腺导管癌中表达下调,CLDN4在膀胱癌中表达和定位均发生改变。因此,推测CLDN s表达或定位的改变导致紧密连接结构和功能受到破坏,从而促进肿瘤的发生和转移。CLDN 4是CLDNs家族27个成员之一,同时也是产气荚膜梭菌肠毒素(CPE)C末端片段的受体。CLDN 4通过细胞外环能够与相邻细胞表面的CLDN 4相互作用,并为细胞旁扩散提供良好的屏障。有研究表明,CLDN 4在食管癌和胰腺癌中表达上调,在结肠癌和胃癌中表达下调。我们的前期工作中发现,与癌旁组织相比,喉癌组织中CLDN 4表达明显下调,甲基化特异性蛋白Me CP2表达明显上调,且两者的表达存在一定相关性;给予喉癌hep-2细胞去甲基化制剂5-aza-d C处理之后CLDN4表达上调,并且CLDN4表达上调可以抑制hep-2细胞的迁移及侵袭能力,那么5-aza-d C上调CLDN4表达是否是通过直接改变其DNA甲基化状态实现的,以及CLDN4是否具有调节喉癌hep-2细胞的迁移和侵袭等恶性表型的作用是本研究丞待解决的关键问题。目的:探讨喉癌hep-2细胞中CLDN4表达下调与DNA甲基化的关系以及CLDN4表达下调对喉癌hep-2细胞恶性表型的影响。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测5-aza-d C作用hep-2细胞对CLDN4基因DNA甲基化状态的影响;采用CCK8实验、划痕实验及Transwell实验分别检测RNAi技术沉默5-aza-d C作用组CLDN4基因对hep-2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:1、低表达CLDN4的hep-2细胞中检测到CLDN4基因的DNA甲基化,而5-aza-d C作用组hep-2细胞未检测到CLDN4基因的DNA甲基化;2、沉默5-aza-d C作用组的CLDN4基因后,hep-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显增强。结论:喉癌hep-2细胞中CLDN4表达下调与DNA甲基化有关;CLDN4表达下调可以促进喉癌hep-2细胞的恶性表型。