不同分子量马尾藻岩藻聚糖硫酸酯的制备及降血脂机理的初步研究

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马尾藻(Sargassum pallidum)是海洋褐藻中的藻类,其属于褐藻门(Phaeophyta),墨角藻目(Fucales)、马尾藻科(Sagassaceae)、马尾藻属(Sargassum)。在海藻多糖中有由多糖结合硫酸基而形成具有活性的岩藻聚糖硫酸酯(Fuciodan),其具有较明显的抗肿瘤、抗病毒、抗凝血及提高机体免疫力等功能。但是由于其分子量过大,因此导致它的溶解性和生物吸收较差,限制了其在各个领域中的研究和应用。本论文采用稀酸降解马尾藻岩藻聚糖硫酸酯,并研究其分离纯化及理化性质,探讨了不同组分马尾藻岩藻聚糖硫酸酯对高脂血症小鼠机体脂质的调节作用,同时初步研究了其降血脂的机理,以期为马尾藻岩藻聚糖硫酸酯的活性评价的建立提供理论依据,为马尾藻的开发提供参考。主要研究内容如下:(1)通过DEAE-52纤维素离子交换柱层析法对已制得的马尾藻岩藻聚糖硫酸酯粗品进行纯化,分离出两个含硫酸基组分(F1、F2),分别经过酸降解和Sephacry凝胶柱进一步分离纯化,得到四个组分(MMWF1、MMWF2、LMWF1和LMWF2)。检测各组分的化学组成,MMWF1、MMWF2、LMWF1和LMWF2的总糖含量分别为57.89%、55.45%、56.18%和52.64%;硫酸基含量分别为18.89%25.11%、14.42%和19.76%;岩藻糖含量分别为15.77%、17.91%、13.44%和16.49%;糖醛酸含量分别为6.34%、6.31%、6.28%和6.17%。MMWF1、MMWF2、LMWF1和LMWF2均为单一峰,平均分子量分别为16.32K、15.49K、7.65K和7.21K。通过GC法测定马尾藻岩藻聚糖硫酸酯各组分的单糖组成,MMWF1、MMWF2、LMWF1和LMWF2均是由鼠李糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、葡糖糖和半乳糖构成,但各组分的单糖含量各不相同。红外光谱测定MMWF1、MMWF2、LMWF1和LMWF2的结构,结果表明四个组分均含有多糖的特征吸收峰和硫酸基的吸收峰。(2)通过高脂饲料喂养诱导小鼠建立高脂血症模型,利用不同分子量马尾藻岩藻聚糖硫酸酯对小鼠的作用,探索其降血脂效果。结果表明,灌胃四种分子量岩藻聚糖硫酸酯对实验小鼠的体重增长无显著影响,但高剂量的四种岩藻聚糖硫酸酯能够明显表明可降低小鼠的肝脏指数(p﹤0.05),预防脂肪肝的产生。四种岩藻聚糖硫酸酯具有显著降低高脂血模型小鼠血清和肝脏TG、TC、LDL-C含量(p﹤0.05)的作用,提高HDL-C含量(p﹤0.05),对动脉粥样硬化指数(AI)也有明显降低效果,具有预防动脉粥样硬化的生成(p﹤0.05)的作用。实验证明高剂量组作用最显著,剂量依赖性较明显。(3)比较研究了四种马尾藻岩藻聚糖硫酸酯对高脂血症模型小鼠体内抗氧化酶活力的影响。结果表明,给予四种马尾藻岩藻聚糖硫酸酯全部可以有效提高小鼠的抗氧化能力,表现为血清和肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性提高,血清和肝脏中丙二醛(MDA)含量降低。其中高剂量组和部分中低剂量组都达到显著水平(p﹤0.05或p﹤0.01)。表明四种马尾藻岩藻聚糖硫酸酯能够提高脂质代谢紊乱小鼠机体的抗氧化能力,恢复机体内的氧化系统平衡,降低脂质过氧化的产生,保持机体内的脂质代谢相关酶的活力,改善并恢复脂质的正常代谢。(4)利用4种马尾藻岩藻聚糖硫酸酯对高脂血症小鼠体内脂质代谢相关酶和胆固醇合成关键酶的效果,比较各自影响的大小。结果表明,4种多糖可显著提高高脂血症小鼠血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)、肝脂酶(HL)、脂蛋白脂酶(LPL)和肝脏LCAT、LPL活性。但对肝脏HL活力影响不显著;但能显著降低血清和肝脏胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶活力。马尾藻岩藻聚糖可能是通过促进脂蛋白代谢关键酶LCAT、HL和LPL活性升高,加快TC和LDL分解代谢;或通过抑制HMG-CoA还原酶,使机体内的TC合成受阻。由此可见马尾藻岩藻聚糖硫酸酯降血脂作用是一个系统工程,是通过多条途径来实现的。
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