【摘 要】
:
禽流感的流行给世界带来了巨大损失,不仅仅表现在养殖业,人类的健康和生命也同时受到了威胁,H4N6作为低致病性的禽流感往往受到忽视,但是鉴于诸多的低致病性禽流感也可以引起流感病毒的大流行,而且往往其带来的灾难令人震惊的缘故,人类应该越来越重视低致病性禽流感的研究,并对其机理、致病性、生物学特性进行深入的研究,以便为以后的分子生物学的研究提供资料。 流感病毒的拯救(the rescue of
论文部分内容阅读
禽流感的流行给世界带来了巨大损失,不仅仅表现在养殖业,人类的健康和生命也同时受到了威胁,H4N6作为低致病性的禽流感往往受到忽视,但是鉴于诸多的低致病性禽流感也可以引起流感病毒的大流行,而且往往其带来的灾难令人震惊的缘故,人类应该越来越重视低致病性禽流感的研究,并对其机理、致病性、生物学特性进行深入的研究,以便为以后的分子生物学的研究提供资料。 流感病毒的拯救(the rescue of virus)是一种反向遗传操作技术(Reverse Genetics),也有人翻译成为“反向遗传学”或“反义遗传学”,即病毒的全长感染性cDNA克隆技术。通过构建RNA病毒的感染性分子克隆,在病毒cDNA分子水平上对其进行体外人工操作,可以进行基因点突变、缺失、插入、颠换、转位和互补等方法对其进行改造,并且在培养的细胞或易感宿主中重新拯救(rescue)出活病毒或类似病毒的物质,是一种人为构建有感染性RNA的技术,同时也是目前反向遗传操作技术应用于病毒研究的热点。而8质粒系统的构建成功,标志又一大突破性的进展,本实验根据该原则,对重组H4N6亚型的禽流感进行拯救。 一H4N6八质粒拯救系统的构建 本实验应用了已构建好的phw2008双向转录/表达载体,其上含有人RNA聚合酶Ⅰ启动子(PIh)、鼠RNA聚合酶Ⅰ终止子(tl),polⅡ启动子和终止子,可以完成转录和表达蛋白的同时进行。将H4N6的HA和NA基因克隆到phw2008载体上,并且与phw2008-PA、phw2008-PB2、phw2008-PB1、phw2008-NP、phw2008-NS、phw2008-M共同组成了8质粒拯救系统。 二、重组H4N6亚型流感病毒的拯救 构建了phw2008-EGFP载体,并且将phw2008-EGFP重组体在细胞中进行转染,验证了双向转录/表达载体phw2008的转染效率及荧光表达,为了下一步的病毒拯救做了铺垫。将以上8质粒共转染293T与MDCK细胞,同时应用细胞中本身具有的聚合酶Ⅰ和Ⅱ,启动双向转录/表达载体上的启动子,同时转录出vRNA和mRNA,最终完成病毒粒子的包装。 三、拯救病毒的鉴定及其生物学特性分析 通过应用RT-PCR、血凝实验、电泳条带图、电镜下观察等方法验证了实验的正确性,并且对其生物学特性进行了分析,为流感病毒变异机理的研究奠定了坚实的基础,同时提供了强有利的借鉴依据.
其他文献
由于电动汽车行业的发展及对高功率器件的需求,传统以硅晶片为基底的器件已经无法满足人们对高功率低能耗的需求;以碳化硅(Si C)为代表的第三代半导体器件的基片材料,具有化学性能稳定、硬度高、耐热性和热导率高等特点,但是价格昂贵。目前Si C硅片的加工方法主要是金刚石线锯切割法,需要经过切割、打磨、抛光等过程,加工过程复杂,而且切割过程会导致46%的材料损耗,加大了碳化硅晶片的成本;而且加工过程要在液
英语学习活动观是《普通高中英语课程标准》(2017年版)的新增理念,是新《课标》修订的重点,是英语课堂教学的基本组织形式,是落实课程目标的主要途径。该理念指出学生应在主题意义引领下,通过学习理解、应用实践、迁移创新等一系列体现综合性、关联性和实践性等特点的英语学习活动,使学生基于已有的知识,依托不同类型的语篇,在分析问题和解决问题的过程中,促进自身语言知识学习、语言技能发展、文化内涵理解、多元思维
课外作业是英语教学的重要组成部分,它是课堂教学的延伸,是英语教学过程中的重要活动和环节。目前,英语课程改革正如火如荼地进行,但是对于课外作业的改革却少有人问津。目前的作业中,作业形式与种类单一、作业量大、作业难度与批改缺乏针对性等问题显著,导致作业不适合大多数学生的水平,作业的作用也大打折扣。幸运的是,2017年颁布的新课标对于改善上述问题提供了具有指导性和可行性的线索和思路。新课标指出,活动是英
<正>民歌是由劳动人民创造的,贴近劳动人民的生活,饱含劳动人民的智慧与情感。在经过长期发展、积淀后,民歌成为我国音乐文化的重要组成部分。从地理文化学视角研究传统民歌流行与传播可以帮助人们进一步了解民歌内涵,探索民歌在新时代的发展道路。《人文地理》和《中国音乐》期刊中的相关文献为开展这方面的研究提供了有力支持。
农业生产对于农村的社会经济发展都具有至关重要的影响。探究农业生产的变迁轨迹对于正确认识历史上的农业,以及为现代农业的发展提供指导都具有一定的现实意义。本文以闽东连江县东湖村为研究对象,梳理该村庄近百年来的农业生产变迁,力图窥见闽东农业发展的基本脉络。东湖地区的农业生产历史悠久,在闽东平原的农业发展中具有一定的代表性。东湖地处平原,自然条件优越,适宜农业的发展;临近县城近郊,国道贯穿全境,交通较为便
基于“趣缘”形成的虚拟社区为众多爱好相近的个体提供了交流互动的平台,随着网络空间“圈层化”愈发明显,用户对自我身份和群体归属的追寻也变得越来越重要,高度的身份认同不仅能对个体的线上线下生活产生重要影响,更能增强群体凝聚力,帮助形成独特的社区文化实践。本研究以时下热门的体育虚拟社区——虎扑体育社区为研究对象,从身份认同视角出发,考察社区成员是如何在个体和群体层面建构身份认同。研究发现,成员具有“体育
这篇论文是关于闽南船底人的渔船帮与信仰实践的研究。清朝时期业已存在且活跃在九龙江流域的渔船帮在船底人聚落中发挥着重要作用。渔船帮可以说是上岸前船底人社会的“核”社会群体。它既可以作为一个生产单位,也是该社会群体的宗教活动的单位。渔船帮成员之间多为宗亲关系,且多为同姓,其内部已经出现了组织分工与集中权威,渔船帮的名字是以固定的停泊地点来命名。民主改革和社会主义改造拉开了九龙江流域船底人上岸的序幕,船
随着我国新型智慧城市概念快速推广,智慧家庭市场规模不断扩大,智慧庭院的搭建已成大势所趋,然而当前对智慧庭院系统基本未见研究,且现有智能设备研究进程中存在用户体验度低、设备兼容性差、不同厂家智能设备无法联动控制、无法统一调控、开发周期长、后期升级维护复杂等问题。针对以上问题,结合实习企业需求,设计一种以庭院作为应用场景的基于泛在物联网的智慧庭院系统。论文主要工作如下:(1)根据相关研究和功能需求分析
2020年在第七十五届联合国大会上国家主席习近平提出,中国将采取更有效的措施加大对节能减排领域的研发力度争取在2030年前二氧化碳排放量达到峰值在2060年前实现碳中和目标。“双碳”目标的提出展示了我国降低碳排放量的决心,同时也是我国经济社会转型升级的内在要求。我国每年使用化石能源排放的二氧化碳量占全社会二氧化碳总排放量的80%,因此促进我国清洁能源消费在能源消费占比中的提高对于推动经济社会实现低
学习型城市发展的强趋势背景下,传统的教育系统已经无法满足“人人皆学”的社会建设需求,而社区教育的开放性、灵活性等特点与学习型城市的特征相契合,发展社区教育是大势所趋。调查显示,Y市作为山东半岛核心城市中的一员,经济发展势头强劲,然而社区教育发展存在的问题较多,表现为居民对社区教育的认知度和参与度都不高,造成这一现象的原因复杂,因此,本研究引用社会资本理论作为探求社区教育发展的新视野,帮助解决上述问