糖尿病周围神经病变证治规律及黄芪桂枝五物汤对高糖环境下施旺细胞PI3K/AKT及氧化应激影响

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:likkjiang
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目的通过对现代文献的研究,探寻糖尿病周围神经病变(DPN)的证型、证素规律以及中药治疗本病的用药规律,为临床中医药诊治本病提供参考依据。实验研究部分以高糖诱导损伤RSC96细胞(施旺细胞)建立DPN模型,进一步研究黄芪桂枝五物汤对该模型的抗氧化应激作用,并探讨PI3K/AKT信号通路对氧化应激的影响。方法1.文献研究部分:通过检索中国知网、万方数据及维普中文科技期刊数据中2000年1月至2020年1月关于DPN的现代文献报道,使用EXCEL 2010及SPSS 25.0软件对数据进行录入及统计分析。2.实验研究部分:(1)体外培养RSC96细胞,以CCK-8法测定细胞存活率为指标,确定合适的药物(包括黄芪桂枝五物汤含药血清、甲钴胺含药血清及PI3K/AKT通路抑制剂LY294002)干预浓度范围,在此浓度范围不会对细胞造成毒性损伤;并选取不同浓度葡萄糖诱导RSC96细胞损伤筛选并确立合适的浓度,建立DPN模型。实验分组共分为6组:空白组、模型组、中药组、西药组、LY294002抑制剂组、中药组+LY294002;(2)El ISA法检测以上6组实验分组细胞上清液中活性氧(ROS)与丙二醛(MDA)的含量,及超氧化物歧化酶(T-SOD)的活力;(3)Western Blot法检测以上6组实验分组细胞内PI3K、AKT、p-AKT(磷酸化AKT)蛋白表达。结果1.文献研究部分:共检索到符合标准的文献134篇。提取证型14个,DPN的常见证型是气虚血瘀,其次为阴虚血瘀、瘀痰阻络;病性证素共得12类,血瘀最常见,其次为阴虚、气虚;134篇文献中,处方89首,药物178味,频次1808,最常使用的前5位药物为黄芪、桂枝、赤芍、红花、鸡血藤,最常使用方剂为黄芪桂枝五物汤,其次为补阳还五汤、益气活血通痹汤、桃红四物汤。2.体外实验研究结果显示:(1)与空白组相比,200m M的葡萄糖能使RSC96细胞存活率明显下降,细胞存活率下降为空白组的70.63±4.41%,并且随着葡萄糖的浓度增加,RSC96细胞的存活率逐渐下降。(2)与空白组相比,模型组MDA、ROS含量均升高,T-SOD活力明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)与模型组相比,以益气活血为主的代表方黄芪桂枝五物汤,其含药血清组(中药组)及甲钴胺含药血清组(西药组)ROS含量均下降,T-SOD活力明显升高,且PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达均升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);但中药组与西药组相对比,二者MDA与ROS的含量、T-SOD的活力以及PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达均无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)与模型组相比较,LY294002抑制剂组的PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达明显下降,ROS含量升高,T-SOD活力下降,差异具有统计学意义(P<0.05)(5)与中药组相比,中药组+LY294002的PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达明显下降,ROS含量升高,T-SOD活力下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论1.DPN证型多为虚实夹杂,其中气虚血瘀最常见,其次为阴虚血瘀、瘀痰阻络;病性证素中,血瘀最常见,其次为阴虚、气虚。中医药治疗DPN常用药功效以补气养阴、活血化瘀、化痰通络为主,并佐以通络止痛、疏肝解郁等,在现代临床用药中,经方黄芪桂枝五物汤作为治疗DPN的常用方被广泛应用。2.黄芪桂枝五物汤可有效减轻高糖环境下诱导RSC96细胞损伤建立的DPN模型的氧化应激损伤。3.黄芪桂枝五物汤可能通过PI3K/AKT信号通路减轻高糖诱导RSC96细胞损伤建立的DPN模型的氧化应激损伤。
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