藜麦多酚和生物碱的提取纯化及性质研究

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藜麦被称为“营养黄金”和“素食之王”,具有很高的营养价值。藜麦被联合国粮农组织认为是唯一一种能满足人体基本营养需求的单体植物,近年来受到全世界各国人民的追捧,因此藜麦也成为了十分重要的农产品经济作物。藜麦口感独特,营养丰富。并且还有增强免疫力、减肥、修复机体等功效,因此在世界范围内拥有广阔的市场。在全球藜麦市场中,藜麦主要的生产地区是南美洲,北美洲和欧洲为主要进口地区。我国曾在20世纪六十年代首次引种藜麦,目前在我国的西藏、山西、青海、四川、陕西等地多有种植,但是产量及品质方面和南美洲有所差距。为了提高藜麦的利用率,本文对藜麦多酚和藜麦生物碱进行提取纯化及性质研究,为藜麦中活性物质的更好利用提供理论依据。(1)采用超声辅助提取法提取藜麦多酚。在单因素实验的基础上进行响应面优化实验。最终得到藜麦多酚的最佳提取工艺为液料比31:1(mL/g),浸提温度66℃,乙醇浓度72%,浸提时间31 min。在此条件下进行3组平行实验,藜麦多酚平均得率为:0.356%。(2)在比较了三种不同的提取方法后,选择回流法来提取藜麦生物碱。在单因素实验的基础上进行响应面优化实验,最终得到藜麦生物碱最佳提取工艺为液料比15:1(mL/g),提取温度80℃,乙醇浓度85%,提取时间2.5h。在此条件下进行3组平行实验,藜麦生物碱的平均得率为247.14ug/g。(3)采用大孔吸附树脂对藜麦多酚粗提物进行初步纯化。选取了五种大孔树脂对藜麦多酚粗提物进行静态吸附与解吸实验,最终选取AB-8型大孔树脂。考察了静态吸附和解吸、动态吸附和解吸条件。结果表明,上样液最佳pH为6,乙醇洗脱液最佳洗脱浓度为80%,最佳上样量为200mL,最佳洗脱剂量选择(210~700),最佳上样速度为1.0BV/h,最佳洗脱速度为2.0 BV/h。在此条件下纯化后的多酚纯度为42.77%。(4)采用大孔吸附树脂对藜麦生物碱粗提物进行初步纯化。对五种大孔树脂进行比较,最终选择D101型大孔树脂。考察了静态吸附和解吸、动态吸附和解吸条件。结果表明,上样液最佳pH为5,乙醇洗脱液最佳洗脱浓度为70%,最佳上样量为150mL,最佳洗脱剂量选择(170~500),最佳上样速度为2.0BV/h,最佳洗脱速度为1.0 BV/h。在此条件下纯化后的生物碱纯度为36.16%。(5)采用葡聚糖凝胶LH-20对经过初步纯化的藜麦多酚进行二次纯化分离。发现30%乙醇洗脱得到的样品2的纯度最高。再对样品2进行紫外光谱和红外光谱扫描,确定了样品2符合多酚类物质的结构特点。最后通过高效液相色谱对样品2进行成分分析。结果表明,藜麦样品2中含有没食子酸、香豆酸、儿茶酚、儿茶素和阿魏酸。再用外标法计算出藜麦多酚样品2中没食子酸为2.932μg/mL,香豆酸为1.632μg/mL,儿茶酚为0.245μg/mL,儿茶素为 0.0859μg/mL,阿魏酸为 14.45μg/mL。(6)采用硅胶层析柱对藜麦生物碱初纯物进行二次纯化分离。首先对展开剂进行了优化实验,结果显示,混合展开剂最佳配比为氯仿:甲醇:乙酸乙酯配=30:45:25。之后进行柱层析实验,最终在在最佳展开剂作用下,分离得到两种物质,样品A和样品B。(7)采用四种体外抗氧化实验对样品2的抗氧化性进行探究。结果表明,纯化后的样品2对DPPH自由基、-OH自由基、ABTS+自由基的清除效果以及还原力均高于未纯化前的多酚提取液。(8)采用牛津杯法探究纯化后藜麦生物碱的抑菌效果。结果显示,样品A和样品B对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为0.37 mg/mL、0.66 mg/mL、1.32 mg/mL、0.33 mg/mL、2.78 mg/mL、6.60 mg/mL、3.53 mg/mL、9.8 1mg/mL。表明样品A和样品B对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用,样品A的抑制作用明显,样品B的抑制作用较弱。
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