见血青化学成分研究与品质评价

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见血青为兰科(Orchidaceae)羊耳蒜属(Liparis)脉羊耳兰(Liparisnervosa (Thunb.) Lindl.)的全草,系民间常用的中草药,具凉血止血和清热解毒功能,用于治疗胃热吐血、肺热咳嗽、疮疡肿毒和跌打损伤等症。本论文采用柱色谱、大孔吸附树脂、气相色谱-质谱联用、波谱和液相色谱技术,对见血青化学成分进行了分离与纯化、化合物结构鉴定、见血青指纹图谱和见血青黄酮含量测定方法进行了研究、获得如下研究结果:1、弄清楚了见血青主要化学成分结构采用柱色谱、大孔吸附树脂和波谱技术,对见血青进行分离纯化,共获得20个化合物,通过理化性质和波谱数据已鉴定化合物20个,其中新化合物2个,新天然产物1个,首次从见血青中分离得到的化合物16个。2、完成了见血青气相色谱-质谱联用分析采用气相色谱-质谱联用技术,对见血青不同极性部位进行分析,从见血青各极性部位共检测出70个峰,鉴定出45个化合物。其中大多数为有机醇类、有机酸类、醛酮类、酚类以及酯类化合物,其次是一些含氮的有机化合物类,含量比较少的是一些甾类和萜类化合物。3、筛选出了见血青的指纹图谱测定方法通过考察各种影响HPLC色谱图的实验因素,筛选出了见血青指纹图谱测定方法和条件:Welchrom-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈(A)-0.2%三乙胺水溶液(10%磷酸水溶液调pH=2.5)(B),梯度洗脱,0~40min,87%~84%B;40~42min,84%~81%B;42~70min,81%~75%B;检测波长254nm;柱温30℃;流速1mL·min-1;进样量20μL。建立了以(hexahydro-1H-pyrrolizin-1-yl)-methyl-3-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-5-(3-methylbut-2-en-1-yl)ben-zoate为参照物的见血青指纹图谱测,经过验证,该方法稳定、简单可行。4、建立了见血青中2种黄酮类成分高效液相色谱(HPLC)含量测定方法通过考察影响见血青中黄酮成分HPLC测定含量方法的实验因素,筛选出了见血青中黄酮含量测定方法和条件: Welchrom-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈(A)-0.2%三乙胺水溶液(10%磷酸水溶液调pH=2.5)(B),梯度洗脱,0~40min,87%~84%B;40~42min,84%~81%B;42~70min,81%~75%B;检测波长254nm;柱温30℃;流速1mL·min-1;进样量20μL。测得10产地见血青中2种黄酮含量在0.0735~0.2123%。经过验证,该方法稳定、简单可行。
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