目的:研究严重发热伴血小板减少综合征病毒对THP-1细胞TLRs表达的影响。方法:1.以SFTSV JS14株为病毒株,用Vero细胞接种培养,每隔24 h收集细胞培养上清并经定量PCR检测SFTSV病毒复制拷贝数,从而选取最佳时间点收获病毒液并用浓缩离心管浓缩病毒,-80℃保存备用。2.将SFTSV病毒液进行10倍比稀释,每梯度200 ul接种六孔板内生长良好的单层Vero细胞,每孔3 ml甲基纤维素-DMEM覆盖物覆盖Vero细胞,9 d后温和去除甲基纤维素-DMEM覆盖物,经预冷的4%甲醛固定细胞后,用结晶紫染色液染色,PBS洗脱3次,计算空斑数获得病毒滴度,单位:PFU/ml。3.六孔板每孔1×10~6THP-1细胞,以MOI 0.1接种SFTSV,实验分为2组,即SFTSV组和Control组,每隔24 h、48 h和72 h收集细胞,用荧光定量PCR检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7和TLR9 mRNA表达;同时,用流式细胞术检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7和TLR9蛋白表达。结果:1.Vero细胞培养SFTSV:(1)根据病毒繁殖生长情况,病毒在第4 d后达复制高峰,故可在4 d后收集病毒液。(2)SFSTV甲基纤维素-结晶紫空斑法形成的空斑清晰可数。2.TLRs表达变化:(1)与Control组相比,SFTSV组THP-1细胞表面TLR2蛋白和mRNA表达升高,且均有统计学差异(P<0.05),其中以48 h时TLR2升高最明显。SFTSV组,48 h与24 h、72 h相比有统计学差异(P<0.05),24h和72 h未见统计学差异。(2)TLR4升高水平高于TLR2。与Control组相比,SFTSV组THP-1细胞表面TLR4蛋白和mRNA表达升高,且均有统计学差异(P<0.05),其中以48 h时TLR4升高最明显。SFTSV组,48 h与24 h、72 h相比有统计学差异(P<0.05),24 h和72 h未见统计学差异。(3)与Control组相比,SFTSV组THP-1细胞内TLR3蛋白和mRNA 24 h均未见明显升高,48 h和72 h表达升高。SFTSV组,48 h、72 h和24 h均有统计学差异(P<0.05),但48 h和72 h未见统计学差异。(4)TLR7蛋白在THP-1细胞内表达较低。与Control组相比,SFTSV组TLR7蛋白和mRNA 24 h未见明显升高,48 h和72 h表达升高。SFTSV组,48 h、72 h和24 h均有统计学(P<0.05),但48 h和72 h未见统计学差异。(5)TLR9蛋白和mRNA均未见明显变化。4结论:1.THP-1细胞表面TLR2和TLR4,细胞内TLR3和TLR7表达均有升高,其中以TLR4升高最明显。TLR9未见明显变化。