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1.目的通过给予0.02%甲巯咪唑药物饮水,制备母鼠孕期甲状腺功能低下模型,在此模型基础上,观察母鼠孕期甲状腺分泌障碍对子代大鼠听觉诱发电位、畸变产物耳声发射等听觉功能的影响以及内耳超微结构和内外毛细胞otoferlin蛋白表达的变化。2.方法2.1采用本校实验动物中心提供的6～8周Ⅱ级雌性及雄性SD大鼠各12只,实验前检查大鼠ABR,确定大鼠听力正常,在安静的环境下饲养1周。雌雄大鼠各1只合笼配对,次日清晨取雌性大鼠阴道分泌物镜检,发现精子作为怀孕第0天(E0)。2.2实验动物分五组:一组对照组。四组实验组分别给予0.02%甲疏咪唑饮水。实验一组,孕后0天(E0)给予0.02% MMI饮水至孕后15天(E15);实验二组,孕后0天(E0)给予0.02% MMI饮水至产后0天(P0);实验三组,孕后15天(E15)给予0.02% MMI饮水至产后5天(P5);实验四组,孕后15天(E15)给予0.02% MMI饮水至产后12天(P12);2.3分别于喂药后1,3,5,10天及停药后1,3,5天取母鼠及子代大鼠血清,测定游离甲状腺素FT3,FT4水平。并取成年子代大鼠甲状腺组织,行冰冻连续切片,进行HE染色,观察其形态学变化。2.4分别采用听觉电生理检测仪,耳声发射仪对产后30天(P30)、60天( P60)、90天( P90)子代大鼠进行听觉电生理检测。分别记录大鼠ABR听阈,刺激声强度在80dB SPL时Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波潜伏期以及DPOAE幅值和SNR。2.5扫描电子显微镜观察实验组及对照组产后P30、P60、P90子代大鼠内毛细胞、外毛细胞形态变化。免疫荧光染色观察实验组和对照组耳蜗毛细胞发育及otoferlin蛋白表达的变化。3.结果3.1造模开始后,母鼠游离甲状腺素水平逐渐下降,子代大鼠生后游离甲状腺素也低于正常水平,停止造模3天后,母鼠和子代大鼠的游离甲状腺素水平基本恢复正常。子代大鼠甲状腺和HE染色未见异常。3.2实验一组ABR阈值与对照组相比统计学尚未见明显差异;实验二、三、四组ABR阈值明显高于对照组,阈值增高程度和母鼠甲状腺功能减退时间段有关,且随着年龄增长未见恢复。生后不同时间子代大鼠DPOAE的幅值、SNR和及不同时间子代大鼠Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波潜伏期,在各组间的差异无统计学意义(P>0.05)。3.3扫描电子显微镜及铺片可见对照组及实验组毛细胞纤毛排列整齐,未见缺失、融合或倒伏。脑干切片进行免疫组织化学染色,实验组和对照组显微镜下观察耳蜗核神经元,胶质细胞数量未见区别。3.4生后不同时间的实验一、二、三组及生后30天、60天的实验四组otoferlin蛋白在耳蜗的表达未见明显变化,在90天实验四组子代大鼠,otoferlin蛋白在耳蜗底转的表达与对照组相比未见明显区别,在顶转,实验组的otoferlin未见明显表达。4.结论4.1利用MMI药物饮水的方法可以制备稳定的孕期和哺乳期甲状腺功能减退动物模型,为实验研究奠定了基础。4.2子代听力发育期,母鼠甲状腺功能减退可导致子代的听功能的损伤,且这种损伤随着母鼠甲状腺功能减退的时间段具有渐进性和不可逆性,但其ABR潜伏期、DPOAE及耳蜗听觉神经传导通路未观察到明显改变,说明其内外毛细胞和神经传导通路未受明显损伤。4.3实验四组甲状腺功能减退大鼠,其子代90天时内耳otoferlin蛋白在耳蜗顶转不表达,导致低频听力功能受影响,说明在听力发育完善期甲状腺功能低下可以造成其子代听力功能的下降,且这种听觉功能的异常和otoferlin蛋白的异常表达相关,这可能和AN的发生有一定关系。