【摘 要】
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本文目的:克隆空肠弯曲菌peb1A基因,构建peb1A基因原核表达载体并进行表达。为空肠弯曲菌的基因工程疫苗研究的基础验打下基础。方法:(1)原核表达载体的构建及鉴定:PCR扩增空肠弯
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本文目的:克隆空肠弯曲菌peb1A基因,构建peb1A基因原核表达载体并进行表达。为空肠弯曲菌的基因工程疫苗研究的基础验打下基础。方法:(1)原核表达载体的构建及鉴定:PCR扩增空肠弯曲菌peb1A基因,扩增产物和质粒pET-28a(+)用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,分别用胶回收试剂盒回收目的片段,将载体和目的插入片段按1:3的比例用T4连接酶进行连接,获得pET-28a(+)-peb1A重组质粒。制备大肠杆菌JM109感受态细胞,将pET-28a(+)-peb1A重组质粒转化大肠杆菌JM109感受态细胞,将转化的菌液涂布于含卡那霉素的LB琼脂平板上培养过夜,然后从LB琼脂平板上挑取阳性克隆接种于LB液体培养基中增殖。抽提质粒进行双酶切鉴定和PCR初步鉴定,经初步鉴定后进行测序鉴定。(2)抽提重组质粒pET-28a(+)-peb1A后转化表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步观察重组蛋白PEB1的表达量并对其进行初步的分析。结论:成功地构建原核表达载体pET-28a(+)-peb1A,并获得重组PEB1蛋白,为基因工程疫苗的研制奠定一定的基础。
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