【摘 要】
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为了改善东北大米的香味与粒长,增加其推广度,本文以水稻香味基因BADH2和水稻粒长基因GL7负调控基因GL7NR为研究对象,利用编辑技术CRISPR/Cas9定向编辑水稻BADH2和GL7NR基因
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为了改善东北大米的香味与粒长,增加其推广度,本文以水稻香味基因BADH2和水稻粒长基因GL7负调控基因GL7NR为研究对象,利用编辑技术CRISPR/Cas9定向编辑水稻BADH2和GL7NR基因。通过农杆菌介导遗传转化体系得到一系列转基因植株。通过传统的PCR技术、测序检测到靶位点存在一个或多个碱基的替换、插入,同时并未检测到脱靶现象的存在。本研究为水稻优良农艺性状的改良提供了一定的技术指导。主要研究结果如下:(1)农杆菌工程菌的构建:将通过生物信息学与PCR检测的重组载体电转入农杆菌体中,通过鉴定及检测得到含有pCAMBIA1301-fgr-sgRNA-Cas9和pCAMBIA1301-g17nr-sgRNA-Cas9载体的农杆菌工程菌株。(2)转基因水稻植株的获得:利用农杆菌介导的遗传转化法将pCAMBIA1301-fgr-sgRNA-Cas9重组农杆菌转化到三个种不同的水稻品种松B12早齐,松B12早大,YYG-10中,并采用常规的PCR技术检测转基因水稻品种中的阳性株系,松B12早齐有18株,松B12早大有14株,YYG-10有21株。将pCAMBIA1301-g17nr-sgRNA-Cas9 重组农杆菌转到入 YYG-22 中,YYG-22 阳性植株有15株。(3)靶位点检测:提取水稻DNA利用常规PCR技术和测序技术检测水稻品种中的突变位点。结果发现松B12早齐有4株,其突变率为22.2%松B12早大有5株其突变率为35.7%,YYG-10有5株其突变率为23.8%,YYG-22有4株其突变率26.6%。(4)T1代香味基因修饰水稻遗传分析:T1代共有25株两人鉴定都香的植株,测定当中无hpt标记植株有13株。测定当中20株的靶位点,结果发现均发生纯合插入突变,当中T碱基插入有15株,C碱基插入有5株。(5)T1代粒长基因修饰水稻遗传分析:T1代的种子长度在突变型与未突变型中大小无显著差异。检测了8株粒长较长的植株,当中2株多位点发生变化,4株是T碱基插入纯合体,2株为发生突变。
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