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研究背景乳腺炎性疾病约占同期乳腺疾病的1/4,按照乳腺的功能状态可以将其分为哺乳期乳腺炎(Lactational abscesses,LA)与非哺乳期乳腺炎(Nonlactational abscesses, NLA)。哺乳期乳腺炎病因明确,多是由乳汁淤积和细菌侵入乳管并上行至腺小叶感染引起。非哺乳期乳腺炎病理类型多样,主要包括导管周围乳腺炎(periductal mastitis, PDM)、乳腺导管扩张症(mammary duct ectasia, MDE)和特发性肉芽肿性小叶乳腺炎(idiopathic granulomatous mastitis,IGM)等。其中乳腺导管扩张症和乳腺导管周围炎在临床上难以鉴别,而治疗方法相同,通常我们将两者称为乳腺导管扩张／导管周围炎。关于非哺乳期乳腺炎性疾病的病因至今没有明确的观点,早在1989年,Dixon教授研究发现由乳腺导管扩张导致的乳头溢液患者细菌培养的阳性率明显高于其他原因所致乳头溢液的患者,由此提出,细菌感染是导致本病发生的主要原因,并认为其中的优势菌群为肠球菌、厌氧性链球菌、金黄色葡萄球菌等。在接下来的几十年时间里,包括布鲁氏杆菌、沙门氏菌、分枝杆菌、艰难梭菌等在内的多种细菌被认为均可导致本病的发生。最近有学者提出棒状杆菌,尤其是kroppenstedtii棒状杆菌与肉芽肿性小叶性乳腺炎发生有着紧密的联系。非哺乳期乳腺炎性疾病与细菌学之间的关系长期以来存在争议,也有学者提出该类疾病的发生可能同以下原因相关：i.内源性或外源性因素使乳管阻塞导致脂质分泌物排泄障碍,最终刺激管壁发生无菌性的炎症反应。ii.由于本病后期常常合并大量浆细胞和淋巴细胞的浸润,因此自身免疫性因素在本病的发生、发展中起关键作用,该病可能是一种自身免疫性的疾病。iii.外伤、异常的激素水平及化学物质的刺激也有可能是诱发本病的主要原因。实验目的本实验拟通过革兰氏染色、抗酸染色、微生物培养、16S rDNA序列测定的方法进一步研究细菌与非哺乳期乳腺炎性疾病的关系,探究乳腺炎性疾病的细菌学分布,为探讨非哺乳期乳腺炎性疾病的发病机制提供理论依据。对象和方法选择2012年6月-2013年3月于我院初治新发的15例非哺乳期乳腺脓肿患者,于手术室无菌条件下取得17份样本,其中组织样本12份,脓液样本5份。(1)将所有样品用革兰染液及抗酸染液染色后,在油镜下寻找是否有细菌的感染;(2)将收集到的5份脓液样本于30分钟内分别接种于血琼脂平板和厌氧瓶中。若培养阳性,鉴定细菌的种类；(3)提取所有样本的DNA,采用PCR法检测所有标本中细菌16S rDNA基因,行琼脂糖凝胶电泳判断扩增结果。根据结果切胶回收并且行基因测序,测序结果与NCBI基因数据库进行比对,鉴定细菌的种属。结果(1)细菌染色组：本次研究所收集的17份样品经革兰染色后,其中41.1%(7份)查见G+(革兰氏染色阳性)细菌,35.5%(6份)查见G-(革兰氏染色阴性)细菌,11.7%(2份)同时查见G+及G-细菌,11.7%(2份)未查见细菌。所有样品经抗酸染色后均未查见分枝杆菌。(2)微生物培养及鉴定：5份脓液样本经培养后仅1例阳性且呈现两种菌生长,经分离纯化后其中G-杆菌经Microsan walkway-96全自动微生物分析仪鉴定为黄色短杆菌,G+细菌鉴定为罕见细菌生长。所有样本均未查见厌氧细菌生长。(3)16S rDNA序列测定组：本实验所收集的17份样本经测序后其中76.5%(13例)呈现不同程度的套峰、杂峰,提示混合感染。另外4份样本峰图单一,与NCBI基因数据库进行比对,其中2份样本(来自于同一患者的组织和脓液)为kroppenstedtii棒状杆菌,1份样本为假单胞菌属,1份样本为faecium肠球菌。结论本实验初步确定非哺乳期乳腺炎性疾病与细菌感染有着密切的联系,以混合细菌感染为主,包括kroppenstedtii棒状杆菌、假单胞菌、蜡状芽孢杆菌、faecium.肠球菌等多种细菌非特异性的感染均可能引起本病的发生。