HOXD8基因在人卵巢癌细胞株SKOV3和SKOV3-DDP中的表达及卵巢癌顺铂耐药的机制研究

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目的:检测同源异型盒基因D8(HOXD8)在人卵巢癌细胞株SKOV3和SKOV3-DDP中的表达,探讨卵巢癌顺铂耐药的机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3及其配对顺铂耐药细胞株SKOV3-DDP,应用XTT比色实验检测SKOV3、SKOV3-DDP细胞株顺铂处理后的半数抑制浓度(IC50),并计算耐药指数;半定量RT-PCR及实时荧光定量PCR、Elisa方法检测HOXD8在SKOV3、SKOV3-DDP细胞株中的表达,探讨同源异型盒基因D8与卵巢癌顺铂耐药的关系。结果:1.细胞经不同浓度顺铂处理72小时后,随着顺铂浓度的增加,细胞抑制率增高,显示出明显的剂量依赖关系;耐药细胞株经顺铂作用后,细胞抑制率明显低于敏感株细胞株(p<0.05)。XTT比色实验结果显示,SKOV3细胞株顺铂IC50值为2.462±0.81ug/ml,SKOV3-DDP细胞株顺铂IC50值为9.174±0.24ug/ml,SKOV3-DDP细胞株的耐药指数为3.73,可进行耐药实验。2.半定量RT-PCR实验结果显示,SKOV3细胞株中HOXD8mRNA的表达水平为0.238±0.037,SKOV3-DDP细胞株中HOXD8mRNA的表达水平为0.707±0.026。与SKOV3细胞株比较,SKOV3-DDP细胞株中HOXD8mRNA的相对表达量明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。荧光定量PCR实验结果显示,SKOV3细胞株中HOXD8mRNA的表达水平为0.1711±0.026,SKOV3-DDP细胞株中HOXD8mRNA的表达水平为0.5761±0.037。与SKOV3细胞株比较,SKOV3-DDP细胞株中HOXD8mRNA的相对表达量明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。3. Elisa实验结果显示,SKOV3细胞株中HOXD8蛋白的表达水平为1584.4±2.08pg/ml, SKOV3-DDP细胞株中HOXD8蛋白的表达水平为4423.3±1.52pg/ml。与SKOV3细胞株比较,SKOV3-DDP细胞株中HOXD8蛋白的表达量明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:HOXD8mRNA与HOXD8蛋白在体外培养的卵巢癌细胞株SKOV3及其顺铂耐药株SKOV3-DDP及中均有表达。SKOV3-DDP细胞株中HOXD8的表达明显高于其在SKOV3细胞株中的表达,其表达的升高与卵巢癌细胞顺铂耐药存在明确的相关性。
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