紫花苜蓿高效共生根瘤菌的筛选及分子标记

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紫花苜蓿是一种优质的豆科牧草,对紫花苜蓿接种高效根瘤菌可以提高其共生固氮效率.该研究选用适宜华北、西北地区生长的不同紫花苜蓿品种,采用蛭石、土壤盆栽试验筛选出与其高效共生的根瘤菌,并应用分子标记技术检验高效共生根瘤菌在盆栽试验及田间小区试验中对紫花苜蓿的接种效果.蛭石盆栽试验选用10株不同的根瘤菌接种四个紫花苜蓿品种(分别是中苜一号、RS、Vecter、WL323),结果表明,各紫花苜蓿品种的地上部分干重、有效根瘤数及总根瘤数与不接种的对照相比差异显著.土壤盆栽试验选用18株根瘤菌(其中包括蛭石盆栽试验中共生效果最好的四株根瘤菌)接种紫花苜蓿品种Vecter,90天后Vecter品种在地上部分干重、地上部分含氮量、总含氮量与对照相比差异明显,部分差异达到显著水平,经统计分析,筛选出了与紫花苜蓿品种Vecter共生匹配最佳的根瘤菌:CCBAU30138、CCBAU96068、CCBAU96068、CCBAU96077和CCBAUN210.通过对根瘤菌CCBAU30138、CCBAU96068和CCBAU96077的IGS进行测序后发现三者之间序列相似性达99.9%,相互之间的BOX-PCR、SDS-PAGE图谱特征完全一致,因此推断它们可能归属于同一株根瘤菌.为检验高效共生根瘤菌在盆栽试验及田间小区试验中的接种效果并计算占瘤率,采用了AFLP、GFP和IGS-RFLP三种分子标记方法,通过比较,证明IGS-RFLP是检测苜蓿根瘤最合适的标记方法.
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