【摘 要】
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背景:卵巢癌（Ovarian cancer,OC）是妇科最常见的肿瘤之一,其病死率居首位,是女性恶性肿瘤的第八大死亡原因。现今,针对卵巢癌早期肿瘤筛查非常重要,但还缺乏有效的筛查标志物和诊断手段,据报道,到目前为止卵巢癌患者就医确诊时约有70%被判断已处于晚期,五年生存患者约为确诊后患者的三分之一左右。尽管近几年医疗水平有所提高,但基于国家癌症中心（National Cancer Center,N
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背景:卵巢癌（Ovarian cancer,OC）是妇科最常见的肿瘤之一,其病死率居首位,是女性恶性肿瘤的第八大死亡原因。现今,针对卵巢癌早期肿瘤筛查非常重要,但还缺乏有效的筛查标志物和诊断手段,据报道,到目前为止卵巢癌患者就医确诊时约有70%被判断已处于晚期,五年生存患者约为确诊后患者的三分之一左右。尽管近几年医疗水平有所提高,但基于国家癌症中心（National Cancer Center,NCC）公布的最新统计数据可知,患者的五年生存率也只是提高了0.4%左右,改善并不明显。近年来,随着高通量测序（Next Generation Sequencing,NGS）技术与转录组学研究的快速发展,与癌症相关的关键驱动基因逐渐被挖掘。有研究表明,糖基磷脂酰肌醇转氨酶（Glycosylphosphatidylinositol-transaminase,GPI-T）复合物对于癌症发生发展发挥着非常关键的作用。磷脂酰肌醇聚糖U类（Phosphatidylinositol glycan,class U,PIGU）是此复合物的主要亚单位,大量研究表明,PIGU的显著高表达与多种肿瘤患者的生存不良结局密切相关,但目前国内关于其与卵巢癌的关系尚未见报道。本研究以生物信息和体外实验结合的方法,首次分析GPI-T复合物相关基因与卵巢癌患者中的相关性,以期发现新的卵巢癌预测生物标志物。目的:探讨糖基磷脂酰肌醇转氨酶（GPI-T）复合物关键基因PIGU在卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法:1、基于TCGA和GETx数据库,对GPI-T复合物相关基因,包括PIGU、PIGT、GPAA1、PIGS、PIGK在卵巢癌的癌组织和癌旁组织中的表达水平进行差异分析;2、以数据库Kaplan-Meier plotter为基础,对糖基磷脂酰肌醇转氨酶（GPI-T）复合物相关基因,包括PIGU、PIGT、GPAA1、PIGS、PIGK在卵巢癌患者中总生存时间和无进展生存时间进行分析来评价对卵巢癌患者预后影响;3、基于GEO数据库,选择出有非癌对照组织的数据集（GSE18520和GSE26712）来验证目的基因的表达水平在卵巢癌的癌组织中的表达情况;4、收集临床数据,借助WB技术,对临床病人的卵巢癌组织以及癌旁组织内目标基因的表达状况开展测定;5、采用CCK8方法检测了沉默目的的基因对A2780和OVCAR3卵巢癌细胞增殖的影响;6、基于TCGA数据库中,根据目的基因表达量的中位数将卵巢癌患者分为高、低表达两组进行差异分析,对其结果在WEBGESTALT在线通路分析网页中进行通路分析;7、采用q RT-PCR实验分析在A2780和OVCAR3卵巢癌细胞系中过表达目的基因和敲低目的基因后对细胞周期通路中相关通路基因的影响情况。结果:1、对比TCGA和GTEx中的数据,相较于非癌组织,卵巢癌组织内的PIGK基因的表达量轻微降低,PIGS基因的表达显著下调,PIGU,PIGT,GPAA1在卵巢癌组织中表达显著上调;2、GEO数据库中,PIGU的表达水平在卵巢癌患者中显著高表达;3、总生存时间和无进展生存时间分析结果显示,只有PIGU对患者的总体生存和无进展生存有不良结果,P值均＜0.05,差异有统计学意义;4、经由WB实验可知,相较于非癌对照组织,卵巢癌组织内PIGU表现为显著高表达;5、CCK8实验结果显示,敲低PIGU处理卵巢癌细胞系后细胞的增殖能力显著性降低;6、WEBGESTALT在线通路分析结果提示,PIGU与卵巢癌细胞周期密切相关;7、经由qRT-PCR测定可知,细胞周期通路下的CDK2,CDK7,E2F1,PLK1,BUB3基因表达与PIGU基因的表达呈正相关关系,TP53基因表达负向相关于PIGU基因的表达,说明PIGU基因的表达影响了细胞周期通路。结论:1、PIGU在卵巢癌组织内显著高表达,该基因过表达和卵巢癌病人的不良预后存在显著联系。2、PIGU高表达会影响细胞周期过程,进而影响卵巢癌的发生发展,具备成为卵巢癌早筛及预测预后标志物的潜力。
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