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目的:胶质瘤是成人和儿童最常见的原发性中枢神经系统肿瘤,约50%的患者表现为恶性胶质瘤。胶质母细胞瘤（GBM）是最常见的恶性弥漫性胶质瘤。手术、替莫唑胺化疗、放疗及皮质类固醇治疗等传统治疗方法均无法显著改善患者预后。近年来研究发现,肿瘤细胞表达MHC-Ⅱ类分子（HLA-Ⅱ）,发挥非经典抗原提呈细胞功能,调控肿瘤相关T细胞浸润以及分化,与肿瘤发生发展密切相关。我们前期研究发现TNF-α介导慢性炎症可以激活Ⅱ型肺上皮细胞（AT-Ⅱ）来源肺腺癌细胞MHC-Ⅱ类分子进而诱导Tregs浸润和分化,与肺腺癌发生密切相关。在黄曲霉毒素G1（AFG1）诱导的小鼠肺腺癌发生模型中,AT-Ⅱ细胞来源的肺腺癌细胞高表达MHC-Ⅱ类分子与肿瘤炎症微环境调控Tregs细胞浸润密切相关。这些研究提示靶向肿瘤细胞MHC-Ⅱ类分子可能成为免疫干预治疗的新靶点。人脑胶质母细胞瘤中,巨噬细胞分泌TNF-α形成促进肿瘤生长的炎症微环境,调控靶基因介导肿瘤细胞的浸润和迁移。人脑胶质母细胞瘤中炎症微环境中,TNF-α刺激是否调控胶质母细胞瘤HLA-Ⅱ类分子（HLA-DP,HLA-DQ和HLA-DR）表达尚不完全清楚,进一步探讨HLA-Ⅱ类分子在胶质母细胞瘤中表达情况及调控机制,有望为开发相关免疫干预靶点提供理论依据。本研究采用人胶质母细胞瘤标本,探讨HLA-Ⅱ类分子在胶质母细胞瘤中的表达及预后情况,HLA-Ⅱ类分子与肿瘤微环境CD68+巨噬细胞浸润及TNF-α表达的相关性;体外培养人单核-巨噬细胞THP-1细胞和胶质母细胞瘤细胞U87和U251细胞,探讨巨噬细胞分泌TNF-α对肿瘤细胞HLA-Ⅱ类分子表达的影响,阐述HLA-Ⅱ亚类分子在胶质母细胞瘤中表达和调控情况。方法:1.选取癌症基因图谱库TCGA（TCGA The Cancer Genome Atlas）,分析HLA-Ⅱ类分子在胶质母细胞瘤组织m RNA水平的表达情况,研究HLA-Ⅱ类分子表达与病人预后的关系。2.采用免疫荧光染色和免疫组织化学染色的方法,检测肿瘤组织中HLA-Ⅱ类分子与TNF-α表达情况,以及CD68+巨噬细胞浸润情况,分析HLA-Ⅱ类分子与TNF-α表达情况及CD68+巨噬细胞浸润之间的关系,以及与患者预后的关系。3.收集河北医科大学第二医院神经外科21名胶质母细胞瘤病人的新鲜瘤组织和瘤旁正常脑组织,对比肿瘤组织和瘤旁正常脑组织中HLA-Ⅱ类分子在蛋白水平的表达差异。4.体外培养U87和U251细胞,给予TNF-α刺激,检测其对肿瘤细胞中HLA-Ⅱ类分子表达的影响;体外培养人单核-巨噬细胞THP-1细胞,诱导分化后取上清并给予anti-TNF-α中和抗体,制成条件培养基与U87/U251细胞共培养,检测巨噬细胞上清对U87和U251细胞中HLA-Ⅱ类分子表达的影响。结果:1.TCGA胶质母细胞瘤相关数据库中HLA-Ⅱ类分子的表达及预后情况统计分析TCGA数据库中HLA-Ⅱ类分子在胶质母细胞瘤m RNA水平的表达值,发现HLA-DP,HLA-DQ和HLA-DR在胶质母细胞瘤中均为高表达,其中高表达HLA-DP与患者不良预后相关。2.人脑胶质母细胞瘤组织标本中HLA-Ⅱ类分子表达及预后情况选取河北医科大学第二医院病理科51例人脑胶质母细胞瘤组织标本以及27例瘤旁正常脑组织标本,免疫组织化学染色发现,HLA-DP、HLA-DQ在肿瘤组织中高表达。收集河北医科大学第二医院神经外科21名胶质母细胞瘤病人的新鲜瘤组织和瘤旁正常脑组织,检测HLA-Ⅱ类分子在蛋白水平的表达情况。结果显示,HLA-DP、HLA-DQ在胶质母细胞瘤组织中高表达。3.人脑胶质母细胞瘤组织标本HLA-Ⅱ类分子及TNF-α表达与CD4+T淋巴细胞、CD68+巨噬细胞浸润之间的关系收集51例人脑胶质母细胞瘤组织标本和27例瘤旁正常脑组织标本,免疫组织化学染色发现,HLA-DP、HLA-DQ及TNF-α在肿瘤组织中高表达,肿瘤细胞周围CD68+巨噬细胞浸润明显增加。肿瘤组织中TNF-α表达和CD68+巨噬细胞浸润与HLA-DP、HLA-DQ的表达密切相关;CD4+T细胞浸润与HLA-DQ的表达密切相关。4.CD68+巨噬细胞表达TNF-α介导胶质母细胞瘤中HLA-DP、HLA-DQ的表达选取河北医科大学第二医院病理科30例人脑胶质母细胞瘤新鲜冰冻组织分别进行免疫荧光和免疫组化染色,HLA-DP、HLA-DQ的免疫组织化学染色评分与同一区域TNF-α和CD68的共表达细胞数具有相关性。以上结果说明,在胶质母细胞瘤中CD68+巨噬细胞通过TNF-α可能参与调控肿瘤细胞上HLA-DP和HLA-DQ的表达。5.THP-1巨噬细胞分泌TNF-α上调U87和U251细胞中HLA-DP、HLA-DQ的表达为进一步验证巨噬细胞分泌TNF-α调控胶质母细胞瘤细胞HLA-DP和HLA-DQ的表达,体外培养人脑胶质母细胞瘤U87和U251细胞系,发现给予不同剂量TNF-α上调HLA-DP、HLA-DQ表达。随后我们体外培养人单核细胞THP-1细胞,诱导分化为巨噬细胞,取上清制成条件培养基与U87和U251细胞进行共培养,结果显示分化的巨噬细胞分泌上清上调HLA-DP、HLA-DQ表达。采用anti-TNF-α中和抗体中和上清中的TNF-α,发现HLA-DP、HLA-DQ表达得到抑制。提示分化的巨噬细胞分泌TNF-α上调U87和U251细胞中HLA-DP、HLA-DQ的表达。结论:1.HLA-Ⅱ类分子在人脑胶质母细胞瘤中高表达。2.肿瘤组织中TNF-α+-CD68+巨噬细胞浸润与HLA-Ⅱ类分子表达具有明显正相关关系。3.巨噬细胞分泌TNF-α介导胶质母细胞瘤中HLA-DP、HLA-DQ的表达。