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目的:以人脐静脉内皮细胞EAhy926为工具细胞,通过体外建立细胞缺氧损伤模型,研究红景天苷类似物对EAhy926细胞缺氧损伤的保护作用,并探讨其可能作用机制。方法:1红景天苷类似物给药浓度的确定及实验分组1.1取对数生长期细胞,通过MTT实验、LDH活性测定,观察红景天苷类似物对EAhy926内皮细胞的保护作用,并确定本实验中红景天苷类似物的给药浓度。1.2实验随机分为正常对照组（Control）、缺氧模型组（Model）、红景天阳性药物组（H）及红景天苷类似物干预组。1.3通过剥夺培养介质中的糖类和氧气,同时用N2取代正常培养环境中的O2,建立EAhy926内皮细胞缺氧模型。2红景天苷类似物对缺氧所致EAhy926细胞损伤的保护作用2.1分别通过光镜和HE染色,观察红景天苷类似物对缺氧条件下EAhy926细胞形态改变的影响。2.2通过台盼蓝染色,观察红景天苷类似物对缺氧条件下EAhy926细胞存活率的影响。2.3通过硫代巴比妥酸法（TBA法）测定细胞内丙二醛（MDA）含量、通过黄嘌呤氧化酶法（羟胺法）检测细胞内总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力,观察红景天苷类似物对缺氧条件下EAhy926细胞脂质过氧化损伤的保护作用。3红景天苷类似物对缺氧所致EAhy926细胞损伤保护作用的机制探讨3.1采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性。3.2采用RT-PCR技术观察各实验组HIF-1αm RNA、VEGF m RNA表达差异。3.3采用Western Blot技术观察各实验组HIF-1α、VEGF、p VHL蛋白表达差异。结果:1红景天苷类似物给药浓度的确定MTT法检测结果显示,与正常对照组细胞（Control）比较,缺氧模型组细胞（Model）活力明显降低（P<0.01）。与缺氧模型组细胞（Model）比较,经红景天苷类似物（1×10-41×10-10mol·L-1）干预后,缺氧损伤细胞的活力均显著增加（P<0.01）。其中,红景天苷类似物1×10-6mol·L-1浓度组细胞活力较模型组增加最为明显（P<0.01）。红景天苷类似物在1×10-6mol·L-11×10-10mol·L-1浓度范围内,细胞活力呈药物剂量相关性。LDH活性结果显示,与正常对照组细胞（Control）比较,缺氧模型组细胞（Model）LDH活性明显升高（P<0.01）。与缺氧模型组细胞（Model）比较,经红景天苷类似物（1×10-41×10-10mol·L-1）干预后,缺氧损伤细胞的LDH活性均显著降低（P<0.01）。红景天苷类似物在1×10-6mol·L-11×10-10mol·L-1浓度范围内,LDH活性随药物浓度降低而增加。因此,本实验中选用的红景天苷类似物的高、中、低剂量分别为:1×10-6mol·L-1、1×10-7mol·L-1、1×10-8mol·L-1。2红景天苷类似物对缺氧所致EAhy926细胞损伤的保护作用2.1形态学观察结果倒置相差显微镜观察结果显示,正常培养EAhy926细胞贴壁生长,呈鹅卵石样铺满底层,胞体饱满,细胞呈多角形或扁平短梭形。缺氧模型组细胞贴壁性较差,细胞皱缩、部分脱落。经红景天苷类似物和阳性药物（红景天苷）干预后,细胞形态得到明显改善。HE染色结果显示,较正常对照组细胞,缺氧模型组细胞胞体变小,核固缩,深染,部分细胞核肿大淡染,细胞间隙增大。红景天苷类似物和阳性药物（红景天苷）干预后,细胞结构和形态均显著改善。2.2台盼蓝染色结果通过台盼蓝染色计算细胞存活率,结果显示,与正常对照组细胞（Control）比较,缺氧模型组细胞（Model）存活率明显降低（P<0.01）。与缺氧模型组细胞（Model）比较,经红景天苷类似物和阳性药物（红景天苷）干预后,缺氧损伤细胞的存活率均显著升高（P<0.01）。2.3细胞内T-SOD活性和MDA含量检测结果与正常对照组细胞（Control）比较,缺氧模型组细胞（Model）内SOD活性显著下降（P<0.01）,MDA含量明显增加（P<0.01）;与缺氧模型组（Model）比较,经红景天苷类似物和阳性药物（红景天苷）干预后,细胞内SOD活性显著增加（P<0.01）,MDA的产生明显减少（高剂量P<0.01,中、低剂量P<0.05）。3红景天苷类似物对缺氧所致EAhy926细胞损伤保护作用的机制探讨3.1 ELISA测定内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性结果与正常对照组细胞（Control）比较,缺氧模型组细胞（Model）内e NOS活性显著下降（P<0.01）;与缺氧模型组（Model）比较,经红景天苷类似物和阳性药物（红景天苷）干预后,细胞内e NOS活性显著增加（P<0.01）。3.2红景天苷类似物对HIF相关因子mRNA表达的影响RT-PCR结果显示,与正常对照组（Control）比较,缺氧模型组（Model）HIF-1αm RNA的表达量显著增加（P<0.01）,而VEGF m RNA的表达量则无统计学差异;与缺氧模型组（Model）相比,红景天苷类似物干预组HIF-1αm RNA的表达量显著下降（P<0.01）,而VEGF m RNA的表达量明显升高（P<0.01）。3.3红景天苷类似物对HIF相关因子蛋白表达的影响Western Blot结果显示,与正常对照组（Control）比较,缺氧模型组（Model）HIF-1α、VEGF蛋白表达水平明显增加（P<0.01）;p VHL蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与缺氧模型组（Model）相比,红景天苷类似物和阳性药物（红景天苷）干预后,HIF-1α蛋白表达降低（P<0.01）;VEGF蛋白表达增加（阳性药物、高剂量,P<0.01）;p VHL蛋白表达水平明显增加（P<0.01）。结论:红景天苷类似物对缺氧所致的血管内皮细胞损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能与抗氧化损伤、增加e NOS活性、通过调控HIF相关因子表达有关。