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目的:本文研究中药制剂复方甘草次酸霜对小鼠迟发型超敏反应(Delayed type hypersensitivity,DTH)的治疗作用,明确其治疗效果和毒副作用,并初步探讨其作用机制。方法:1复方甘草次酸霜对脾脏细胞的毒性作用MTT法检测甘草次酸体外对小鼠脾脏细胞的毒性,检测其对正常细胞的杀伤作用,明确其给药剂量下是否对机体具有毒性作用。2复方甘草次酸霜对淋巴细胞增殖的作用MTT法测定复方甘草次酸霜在体外对刀豆蛋白A(Con A)及脂多糖(LPS)诱导的小鼠T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖抑制作用,以检测甘草次酸对于淋巴细胞增殖具有抑制作用,并明确其抑制作用的选择性。。3复方甘草次酸霜对小鼠迟发型超敏反应的作用经皮涂抹给药观察不同剂量的复方甘草次酸霜(0.5%、1%、2%)对小鼠迟发型超敏反应作用后的体重变化、耳肿胀度、耳肿胀重量差、脾脏指数及H&E染色检测耳组织病理学变化,通过分析以上指标确定甘草次酸霜对小鼠DTH的治疗作用。4复方甘草次酸霜对炎症因子产生的影响ELISA法检测不同剂量复方甘草次酸霜对小鼠迟发型超敏反应作用后炎症因子IL-1β和TNF-α在小鼠血清内的含量,分析其对体内炎症反应的作用机制。5复方甘草次酸霜对炎症因子基因表达的影响RT-PCR法检测不同剂量复方甘草次酸霜对小鼠变应性接触性皮炎作用后耳组织中炎症相关因子IFN-γ、IL-6、IL-17a和ROR-γt m RNA表达,在基因层面上继续研究复方甘草次酸霜的作用机制和作用通路。结果:MTT法检测发现复方甘草次酸霜在体外对小鼠脾淋巴细胞无毒性,IC50>1mmol/L,优于阳性药霉酚酸酯(23.22μmol/L)。在24和48小时抑制经由Con A诱导的脾脏T淋巴细胞增殖且有一定的时间和剂量依赖性,对于LPS诱导的脾脏B淋巴细胞增殖亦表现出抑制作用,但效果弱于阳性药。证明复方甘草次酸霜在体外具有选择性抑制脾脏T淋巴细胞的作用。不同给药剂量复方甘草次酸霜(0.5%、1%、2%)多次经皮涂抹给药后,中、高剂量组能明显改善由DNFB诱导的DTH小鼠的耳组织水肿、体重下降、脾指数升高;耳组织切片H&E染色显示中高剂量组能明显减轻耳部表皮的基底层和棘层组织间隙水肿,炎症细胞浸润,以上证明复方甘草次酸霜在体内表现出较好的治疗效果,可以有效缓解DTH导致的各种过敏症状和炎症反应。RT-PCR和ELISA结果显示复方甘草次酸霜能够下调炎症因子IL-1β、IFN-γ、ROR-γt、IL-6和IL-17a的基因表达,减少免疫细胞分泌相关炎症因子以抑制炎症反应加剧;证实复方甘草次酸霜具有免疫抑制作用,能减轻炎症反应,缓解迟发型超敏反应。结论:复方甘草次酸霜是以从中草药甘草中提取出的单体化合物甘草次酸为主要成分经皮给药制剂,对小鼠迟发型超敏反应有良好的治疗效果,可有效改善由迟发型超敏反应引起的体重减轻,皮肤水肿、溃疡等炎症症状。经结果分析得知,GA治疗DTH的机制可能是通过抑制IFN-γ、IL-6和IL-17a基因表达,降低IL-1β和TNF-α炎症因子的分泌,以发挥抗炎抑制作用。因此,复方甘草次酸霜的主要成分为甘草次酸,是来自中药甘草的单体化合物,本实验证明其具有良好的抗炎和免疫抑制作用,具有广泛的应用前景,有望开发成为具有自主知识产权的新型免疫抑制药物。